[發明專利]羊肉中雞源成分的檢測引物、檢測試劑盒及應用與檢測方法

在審

• 申請號: 201811048021.5
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN108998546A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 陳世界;林華;張婧;楊苗;安微;唐廷廷
• 申請（專利權）人: 四川出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 楊志廷

本發明提供了羊肉中雞源成分的檢測引物、檢測試劑盒及應用與檢測方法，屬于生物學檢驗檢疫領域。本發明提供的羊肉中雞源成分的檢測引物，具有較好的特異性，能特異性的檢測出雞肉成分；而將羊肉中雞源成分的檢測引物應用到檢測試劑盒中，能更加方便于檢測的實施；羊肉中雞源成分的檢測方法，能通過檢測并計算出樣品中雞肉成分的含量，是一種穩定、準確、有效的定量檢測方法，具有較好的實際應用價值。

技術領域

本發明涉及生物生物學檢驗檢疫領域，具體而言，涉及羊肉中雞源成分的檢測引物、檢測試劑盒及應用與檢測方法。

背景技術

隨著人們生活水平不斷提高，羊肉作為低脂肪、低膽固醇及高蛋白的保健性肉類食品，越發受到廣大消費者的喜愛。據統計，2016年羊肉行業產量就達454萬噸，預測2022年其產量能上升到533萬噸[1]。巨大的羊肉消費市場，導致羊肉制品摻假事件頻繁發生，引起了全社會的廣泛關注。許多不法商販為謀取暴利，利用低價肉部分填充或全部替代高價肉，如羊肉中摻入鴨肉、狐貍肉、豬肉、馬肉、雞肉、鼠肉等。據文獻報道，2013～2015年中國北京、廣東、山東、天津、上海等地區的羊肉制品中均檢測發現存在雞源性成分，但目前的國家標準、行業標準檢測方法都只能定性檢測，無法有效區分故意摻假還是無意污染，不能有效保證監管部門的正確執法。因此，急需建立一種穩定、準確、有效的定量檢測方法，為執法監管部分提供具有說服力的檢測結果，做到不錯查、不漏查。

發明內容

本發明的第一目的在于提供羊肉中雞源成分的檢測引物，能方便快捷的檢測羊肉中的雞源成分。

本發明的第二目的在于提供上述的羊肉中雞源成分的檢測引物在檢測羊肉中雞源成分中的應用。

本發明的第三目的在于提供上述的羊肉中雞源成分的檢測引物在制備檢測羊肉中雞源成分的試劑盒中的應用。

本發明的第四目的在于提供一種羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，通過該試劑盒，方便實驗，便于操作。

本發明的第五目的在于提供一種羊肉中雞源成分的檢測方法，通過該方法，能快速檢測和得到待檢樣品中雞源成分質量百分含量，為市場監督提供可靠的參考。

為了實現本發明的上述目的，采用以下技術方案：

羊肉中雞源成分的檢測引物，檢測引物包括檢測羊肉成分的第一引物對和第一探針，以及檢測雞源成分的第二引物對和第二探針；第一引物對的堿基序列如SEQ ID NO.1-2所示，第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.3所示，第二引物對的堿基序列如SEQ ID NO.4-5所示，第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.6所示。

上述的羊肉中雞源成分的檢測引物在檢測羊肉中雞源成分中的應用。

上述的羊肉中雞源成分的檢測引物在制備檢測羊肉中雞源成分的試劑盒中的應用。

一種羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，檢測試劑盒包括上述的羊肉中雞源成分的檢測引物。

一種羊肉中雞源成分的檢測方法，檢測方法包括以下步驟：

取雞肉和羊肉樣品分別提取基因組DNA，進行ddPCR和熒光定量PCR，確定雞肉樣品和羊肉樣品的基因拷貝數和Ct值的線性關系；

定量取樣雞肉樣品和羊肉樣品，并分別提取的基因組DNA，進行ddPCR試驗，獲得雞肉樣品和羊肉樣品質量與基因拷貝數的線性關系；

通過基因拷貝數和Ct值的線性關系以及質量與基因拷貝數的線性關系，獲得雞肉樣品和羊肉樣品質量與Ct值的關系，并得到雞肉與羊肉質量百分比關系；

取待檢樣本并提取基因組DNA，進行熒光定量PCR試驗，獲得待檢樣本的Ct值，通過雞肉樣品和羊肉樣品質量與Ct值的關系，計算得到待檢樣本雞肉含量的百分比。