[發明專利]羊肉中雞源成分的檢測引物、檢測試劑盒及應用與檢測方法

在審

• 申請號: 201811048021.5
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN108998546A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 陳世界;林華;張婧;楊苗;安微;唐廷廷
• 申請（專利權）人: 四川出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 楊志廷

1.羊肉中雞源成分的檢測引物，其特征在于，所述檢測引物包括檢測羊肉成分的第一引物對和第一探針，以及檢測雞源成分的第二引物對和第二探針；所述第一引物對的堿基序列如SEQ ID NO.1-2所示，所述第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.3所示，所述第二引物對的堿基序列如SEQ ID NO.4-5所示，所述第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根據權利要求1所述的羊肉中雞源成分的檢測引物，其特征在于，所述第一探針和所述第二探針的5’端包括第一熒光基團，3’端包括第二熒光基團，所述第一熒光基團和所述第二熒光基團不相同，所述第一熒光基團為FAM、MGB、VIC、TET、BHQ1、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、Texas Red、RED670或NED中的一種，所述第二熒光基團為FAM、MGB、VIC、TET、BHQ1、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中的一種。

3.如權利要求1或2所述的羊肉中雞源成分的檢測引物在檢測羊肉中雞源成分中的應用。

4.如權利要求1或2所述的羊肉中雞源成分的檢測引物在制備檢測羊肉中雞源成分的試劑盒中的應用。

5.一種羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括如權利要求1或2所述的羊肉中雞源成分的檢測引物。

6.根據權利要求5所述的羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括基因組DNA提取試劑、ddPCR反應試劑和熒光定量PCR反應試劑。

7.根據權利要求6所述的羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，其特征在于，所述基因組DNA提取試劑為PBS緩沖液、蛋白酶K、組織消化液GHA以及TB溶液中的至少一種。

8.根據權利要求7所述的羊肉中雞源成分的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應試劑包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺中的至少一種，所述ddPCR反應試劑包括TMSupermix forprobes試劑。

9.一種羊肉中雞源成分的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

取雞肉和羊肉樣品分別提取基因組DNA，進行ddPCR和熒光定量PCR，確定所述雞肉樣品和所述羊肉樣品的基因拷貝數和Ct值的線性關系；

定量取樣所述雞肉樣品和所述羊肉樣品，并分別提取的基因組DNA，進行ddPCR試驗，獲得所述雞肉樣品和所述羊肉樣品質量與基因拷貝數的線性關系；

通過基因拷貝數和Ct值的線性關系以及質量與基因拷貝數的線性關系，獲得所述雞肉樣品和所述羊肉樣品質量與Ct值的關系，并得到雞肉與羊肉質量百分比關系；

取待檢樣本并提取基因組DNA，進行熒光定量PCR試驗，獲得所述待檢樣本的Ct值，通過所述雞肉樣品和所述羊肉樣品質量與Ct值的關系，計算得到所述待檢樣本雞肉含量的百分比。

10.根據權利要求9所述的羊肉中雞源成分的檢測方法，其特征在于，所述ddPCR反應程序為：95℃預變性10min，94℃變性30s，60℃退火1min，45個循環，98℃固化微滴10min；

所述羊肉樣品的熒光定量PCR的反應程序為：95℃預變性5min，95℃變性30s，59-62℃退火34s，45個循環；

所述雞肉樣品的熒光定量PCR的反應程序為：95℃預變性5min，95℃變性30s，54-56℃退火34s，45個循環。