[發(fā)明專利]一種基于免疫層析技術(shù)的檢測古代絲織品的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811047599.9
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109187960A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王秉;李青青;歐陽毅;劉林帥;彭志勤;胡智文
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33265
• 代理人: 侯蘭玉

本發(fā)明涉及文物檢測領(lǐng)域，公開了一種基于免疫層析技術(shù)的檢測古代絲織品的方法。本發(fā)明采用甲酸、硝酸鈣溶液體系提取絲素蛋白，然后使用硒化鎘/硫化鋅量子點制備出一種高度發(fā)光的量子點珠。在使用免疫層析試紙檢測時，量子點珠與絲素蛋白抗體結(jié)合，T線噴涂絲素蛋白，C線噴涂山羊抗兔抗體，待測絲織品文物樣與量子點珠絲素蛋白抗體結(jié)合體在層析作用下移動，通過T、C線的熒光情況，即可判斷文物樣種屬。本發(fā)明在對絲織品文物樣檢測時具有快捷、直觀、準(zhǔn)確、高靈敏度點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及文物檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種基于免疫層析技術(shù)的檢測古代絲織品的方法。

背景技術(shù)

中國自古以來就是紡織品大國，生產(chǎn)的紡織品種類豐富，工藝精美，舒適透氣。其中最負(fù)盛名的紡織品就是中國的絲綢，故中國又被稱為“絲綢之國”。絲綢的主要成分是桑蠶絲，桑蠶絲主要由絲素蛋白和絲膠兩部分組成，絲素蛋白是蠶絲的主要組成部分，約占總重量的70%。并且桑蠶絲作為一種有機高分子材料，易受光、熱、酸堿、微生物等的影響發(fā)生降解，從而造成結(jié)晶度、分子量等結(jié)構(gòu)及性能的變化，所以常規(guī)的檢測方法靈敏度低，受雜質(zhì)干擾影響大，不適合對文物進行檢測，因此需要開發(fā)一種快捷、簡單、靈敏度高的檢測古代絲織品的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種基于免疫層析技術(shù)的檢測古代絲織品的方法，利用本發(fā)明方法對古代絲織品進行檢測時，具有快捷、簡單、靈敏度高的特點。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：一種基于免疫層析技術(shù)的檢測古代絲織品的方法，以mg、g和μl、ml計，步驟如下：

A)稱取18-22mg硒化鎘/硫化鋅量子點，118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78-82mg的聚馬來酸酐-十八烯共聚物，加入至1.8-2.2ml的氯仿中，與4.5-5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸鈉水溶液混合，超聲均化處理，再將氯仿蒸發(fā)；然后將所得水溶性量子點珠離心純化，用去離子水清洗2-4次。

本發(fā)明中制備的量子點珠包含很多個硒化鎘/硫化鋅量子點，發(fā)光強度是單個硒化鎘/硫化鋅量子點的幾千倍，在檢測過程中起到熒光信號放大的作用。

B)稱取4-6g桑蠶絲置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸鈉溶液中，水浴55-65min，水浴溫度為80℃，取出用去離子水清洗三次以上，干燥。

C)取1.8-2.2g烘干的絲素，2.3-2.7g硝酸鈣，加入甲酸48-52mL，攪拌80-100min，過濾加入碳酸氫鈉直至溶液呈中性，透析冷凍干燥后，將得到的絲素蛋白研磨成粉，得到絲素蛋白粉。

本發(fā)明使用硝酸鈣、甲酸體系溶解絲素，既能增加對絲素的溶解度，又能減小對絲素分子鏈的破壞，而且該體系在常溫下即可完成對絲素的溶解，無需加熱。

D)取0.9-1.1μg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，0.1-0.14mg的步驟A）中的水溶性量子點珠加入到2.5 -3.1mlPBS 7.4緩沖液中，然后邊緩慢攪拌邊逐滴加入90-110μl 用稀釋到1000倍的絲素蛋白抗體，在室溫下放置35-45min，離心，取沉淀物用600μlPBS 7.4緩沖液重懸，然后存放在1-5℃環(huán)境下備用。

E)取4-6μl經(jīng)步驟D）處理后的溶液噴涂在玻璃纖維素膜上，將其置于35-40℃下干燥，將4.8mg/ml的絲素蛋白和稀釋至3000倍的山羊抗兔抗體分別劃在硝酸纖維素膜的檢測線（T）和質(zhì)控線（C）上，并置于35-40℃下干燥。

F)在PVC底板長1-2 cm端下側(cè)粘貼樣品墊，在PVC底板下方距離0.8-1.2cm處粘貼量子點珠結(jié)合墊，在PVC底板中間2.3-2.7cm處粘貼硝酸纖維素膜，在PVC底板上方1.8-2.2cm處粘貼吸水墊，將組裝好的條板切成寬3.8-4.2mm的條狀，裝于塑料卡中備用。