[發(fā)明專利]一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811047599.9
• 申請(qǐng)日: 2018-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN109187960A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秉;李青青;歐陽毅;劉林帥;彭志勤;胡智文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33265
• 代理人: 侯蘭玉

1.一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法，其特征在于，以mg、g和μl、ml計(jì)，步驟如下：

A)稱取18-22mg硒化鎘/硫化鋅量子點(diǎn)，118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78-82mg的聚馬來酸酐-十八烯共聚物，加入至1.8-2.2ml的氯仿中，與4.5-5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸鈉水溶液混合，超聲均化處理，再將氯仿蒸發(fā)；然后將所得水溶性量子點(diǎn)珠離心純化，用去離子水清洗2-4次；

B)稱取4-6g桑蠶絲置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸鈉溶液中，水浴55-65min，水浴溫度為80℃，取出用去離子水清洗三次以上，干燥；

C)取1.8-2.2g烘干的絲素，2.3-2.7g硝酸鈣，加入甲酸48-52mL，攪拌80-100min，過濾加入碳酸氫鈉直至溶液呈中性，透析冷凍干燥后，將得到的絲素蛋白研磨成粉，得到絲素蛋白粉；

D)取0.9-1.1μg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，0.1-0.14mg的步驟A）中的水溶性量子點(diǎn)珠加入到2.5 -3.1mlPBS 7.4緩沖液中，然后邊緩慢攪拌邊逐滴加入90-110μl用稀釋到1000倍的絲素蛋白抗體，在室溫下放置35-45min，離心，取沉淀物用600μl PBS7.4緩沖液重懸，然后存放在1-5℃環(huán)境下備用；

E)取4-6μl經(jīng)步驟D）處理后的溶液噴涂在玻璃纖維素膜上，將其置于35-40℃下干燥，將4.8mg/ml的絲素蛋白和稀釋至3000倍的山羊抗兔抗體分別劃在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線（T）和質(zhì)控線（C）上，并置于35-40℃下干燥；

F)在PVC底板長(zhǎng)1-2 cm端下側(cè)粘貼樣品墊，在PVC底板下方距離0.8-1.2cm處粘貼量子點(diǎn)珠結(jié)合墊，在PVC底板中間2.3-2.7cm處粘貼硝酸纖維素膜，在PVC底板上方1.8-2.2cm處粘貼吸水墊，將組裝好的條板切成寬3.8-4.2mm的條狀，裝于塑料卡中備用；

G)在樣品加入口處加入經(jīng)處理的待測(cè)樣品70-80μl，在室溫下放置10-20min后，用光學(xué)讀取器掃描試紙條帶，若只有質(zhì)控線出現(xiàn)熒光，說明所測(cè)樣品含有桑蠶絲，同時(shí)在另一相同裝置樣品入口處加入70-80μl的用CB 9.6緩沖液配制的100μg/ml的絲素蛋白經(jīng)過相同處理后形成對(duì)照。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法，其特征在于，步驟A）中，離心速率為8000-12000rpm，離心時(shí)間為8-12min。

3.如權(quán)利要求1所述的一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法，其特征在于，步驟D）中，PBS 7.4緩沖液的配制方法為：稱取0.2 g 氯化鉀，0.27 g磷酸二氫鉀，8 g氯化鈉和1.42 g磷酸氫二鈉加入到800 mL 去離子水中均勻攪拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，調(diào)節(jié)溶液的pH至7.4。

4.如權(quán)利要求1所述的一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法，其特征在于，步驟D）和E）中，使用1wt%BSA稀釋抗體。

5.如權(quán)利要求1所述的一種基于免疫層析技術(shù)的檢測(cè)古代絲織品的方法，其特征在于，步驟G）中，待測(cè)樣品的處理方法為：取0.02-0.2g文物樣溶解于100mlCB 9.6緩沖液，混合攪拌均勻，靜置，取上清液。