[發(fā)明專利]靶向前列腺癌的重組溶瘤腺病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811045396.6
• 申請(qǐng)日: 2018-09-07
• 公開（公告）號(hào): CN110885798B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方先龍;李潤(rùn)生;章康健;顧錦法;劉新垣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海元宋生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;A61K35/761;A61P35/00;A61K31/337
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明;趙孟琴

本發(fā)明公開了一種靶向前列腺癌的重組溶瘤腺病毒Onco^Ad?DD3?E1A?△E1B?mK5，所述重組溶瘤腺病毒由DD3啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)腺病毒E1A基因，腺病毒基因組敲除了E1B基因區(qū)域，同時(shí)，插入外源基因mk5。本發(fā)明還公開了所述重組溶瘤腺病毒的構(gòu)建方法及其在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用。采用本發(fā)明的構(gòu)建方法獲得的重組溶瘤腺病毒具有毒性低、抗前列腺癌效果好，且對(duì)抗癌藥物多西他賽起到協(xié)同增效作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是關(guān)于一種靶向前列腺癌的重組溶瘤腺病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

對(duì)于早期前列腺癌，多采用外科手術(shù)的方法切除腫瘤，效果也較好。然而由于前列腺癌相較其它癌癥發(fā)病隱匿，生長(zhǎng)較為緩慢，潛伏期和平均倍增時(shí)間較長(zhǎng)等特點(diǎn)，多數(shù)前列腺癌病人就診時(shí)病變已至晚期階段。此時(shí)手術(shù)的方法已不可行，多采用以降低雄激素水平為主的內(nèi)分泌治療方式。這種方式初期是有效的，但隨著治療的進(jìn)行，前列腺癌會(huì)慢慢進(jìn)展為雄激素非依賴性，對(duì)這一治療手段不再敏感。

除此之外還有傳統(tǒng)的放化療手段，但都存在療效差，副作用高的缺點(diǎn)，除可一定程度上緩解患者的癥狀之外，不能有效的延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。

多西他賽(Docetaxel)，又稱多西紫杉醇，是紫杉烷類的成員，是一類與微管蛋白結(jié)合的細(xì)胞毒性化學(xué)治療劑，從而穩(wěn)定微管并引起細(xì)胞周期停滯和凋亡。多西他賽是一種經(jīng)典的廣譜抗腫瘤藥物，廣泛用于多種癌癥的治療，己成為治療晚期前列腺癌的一線化療藥物。然而因患者自身耐受差、藥物選擇性弱等原因亦導(dǎo)致化療失敗或復(fù)發(fā)，使其療效欠佳。

血管新生(angiogenesis)是一項(xiàng)牽涉頗廣的生理機(jī)能。除某些正常生理情況外，很多病理情況也涉及血管新生，如傷口愈合、糖尿病增殖性視網(wǎng)膜病變、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤生長(zhǎng)等。就腫瘤而言，研究表明其生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移均依賴于血管生成。腫瘤生長(zhǎng)初期不需要血管新生，但生長(zhǎng)至l～2mm³后，再繼續(xù)增長(zhǎng)就必須靠血管新生供給充足的營(yíng)養(yǎng)才能維持。血管形成愈豐富，腫瘤生長(zhǎng)愈旺盛。腫瘤不僅借助新生血管獲得充分的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供給，帶走代謝廢物；腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散也是通過血管進(jìn)行的。

當(dāng)前應(yīng)用于抗腫瘤的血管新生抑制劑有一類屬于大分子蛋白的水解產(chǎn)物，比如已應(yīng)用于臨床的內(nèi)皮抑素(endostatin)和血管抑素(angiostatin)，它們分別是collagenXVIII和纖溶酶原的水解產(chǎn)物。纖溶酶原是溶解纖維蛋白和溶解血栓過程中關(guān)鍵的酶原前體之一，結(jié)構(gòu)上由7個(gè)緊密相連、相互協(xié)調(diào)的結(jié)構(gòu)域組成，包括5個(gè)同源性很高的餅環(huán)狀結(jié)構(gòu)域kringle1～5，這5個(gè)kringle環(huán)的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)有50％左右的同源性。血管抑素包含纖溶酶原的前四個(gè)Kringle，具有特異性抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新生血管形成的作用，在體內(nèi)外的腫瘤模型試驗(yàn)均已證實(shí)了血管抑素通過抑制腫瘤血管生長(zhǎng)能夠有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)。后來，Cao等人又發(fā)現(xiàn)纖溶酶原第5個(gè)餅環(huán)區(qū)(kringle 5)具有較angiostatin更強(qiáng)的抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的能力，可更有效的抑制由生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的新生血管增殖，并能誘導(dǎo)部分腫瘤細(xì)胞凋亡，對(duì)病理性血管新生疾病及腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移有著明顯的治療效果。然而，當(dāng)前對(duì)纖溶酶原及其餅環(huán)結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)還了解甚少，尤其是結(jié)構(gòu)與其功能的關(guān)系。Chang等人構(gòu)建了一個(gè)K5的LBS區(qū)點(diǎn)突變L71R，發(fā)現(xiàn)當(dāng)K5第71位的亮氨酸突變?yōu)閴A性氨基酸精氨酸后，對(duì)ω-氨基酸配體如賴氨酸類似物EACA的親合力明顯提高。但這種突變的K5(又稱mK5)在癌癥治療應(yīng)用領(lǐng)域研究較少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種靶向前列腺癌的重組溶瘤腺病毒Onco^Ad-DD3-E1A-△E1B-mK5。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種所述的靶向前列腺癌的重組溶瘤腺病毒Onco^Ad-DD3-E1A-△E1B-mK5的構(gòu)建方法。