[發(fā)明專利]用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的引物、檢測方法及試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811044875.6 | 申請日： | 2018-09-07 |
| 公開（公告）號： | CN109306374A | 公開（公告）日： | 2019-02-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳淵能;何浪平;陳韻姿 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州健天基因技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司 44228 | 代理人： | 張小黎 |
| 地址： | 510663 廣東省廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 突變 檢測 試劑盒 熒光信號 擴(kuò)增 引物 等位基因特異性 實(shí)時熒光PCR 超靈敏檢測 特異性結(jié)合 野生型序列 非特異性 檢測引物 擴(kuò)增片段 特異序列 突變位點(diǎn) 突變序列 準(zhǔn)確檢測 靈敏度 野生型 阻斷劑 檢出 樣本 | ||
1.用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：將用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的引物、阻斷劑、檢測熒光信號基團(tuán)、待測基因樣品混合，進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR，獲得檢測結(jié)果；
其中，所述引物序列包括突變上游引物和突變下游引物，其中，所述突變上游引物，其長度為15-40個堿基，與待測PIK3CA基因E545K突變型的一條鏈互補(bǔ)；所述突變下游引物長度為15-40個堿基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的堿基為突變位點(diǎn)，與待測PIK3CA基因E545K突變型的另一條鏈互補(bǔ)；
所述阻斷劑能與PIK3CA基因E545K突變位點(diǎn)野生型序列特異性結(jié)合，抑制野生型非特異擴(kuò)增。
所述檢測熒光信號基團(tuán)能與PCR擴(kuò)增片段結(jié)合并發(fā)出熒光信號。
2.如權(quán)利要求1所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，所述突變上游引物，其長度為32個堿基，與待測PIK3CA基因E545K突變型的一條鏈互補(bǔ)。
3.如權(quán)利要求1所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，所述突變下游引物其長度為25個堿基，其中3’末端的第3位堿基為突變位點(diǎn)，與待測PIK3CA基因E545K突變型的另一條鏈互補(bǔ)。
4.如權(quán)利要求1所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，所述突變上游引物的序列包括：
CAGACTAGCTAGAGACAATGAATTAAGGGAAA(SEQ ID NO.1)，
所述突變下游引物的序列包括：
CATAGAAAATCTTTCTCCTGCTTAG(SEQ ID NO.2)。
5.如權(quán)利要求1所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，所述阻斷劑包括：匹配PIK3CA野生型基因的核酸序列，所述核酸序列修飾有化學(xué)基團(tuán)；
其中，所述阻斷劑中匹配PIK3CA野生型基因的核酸序列包括：TCTCTGAAATCACTGAGCAGGAG(SEQ ID NO.3)；
所述化學(xué)修飾基團(tuán)包括：胺基、磷酸基團(tuán)、生物素、生物素-TEG及C3-spacer中的一種或多種。
6.如權(quán)利要求1所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的檢測方法，其特征在于，所述檢測熒光信號基團(tuán)包括：FAM、Cy3、HEX、Texas Red、JOE、VIC、TAMRA、Cy5、SYTO9、SYBRMIX中的一種或多種。
7.用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的引物，其特征在于，所述引物序列包括突變上游引物和突變下游引物，其中，所述突變上游引物，其長度為15-40個堿基，與待測PIK3CA基因E545K突變型的一條鏈互補(bǔ)；所述突變下游引物長度為15-40個堿基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的堿基為突變位點(diǎn)，與待測PIK3CA基因E545K突變型的另一條鏈互補(bǔ)。
8.用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒，包括如權(quán)利要求7所述的用于檢測人類PIK3CA基因E545K突變的引物，還包括阻斷劑以及檢測熒光信號基團(tuán)。
9.如權(quán)利要求1所述的方法、權(quán)利要求7所述的引物、和/或權(quán)利要求8所述的試劑盒在檢測人類PIK3CA基因E545K突變中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1所述的方法、權(quán)利要求7所述的引物、和/或權(quán)利要求8所述的試劑盒在突變型基因的濃度不低于1％、0.1％、0.01％或0.001％的樣品中檢測人類PIK3CA基因E545K突變中的應(yīng)用。
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