[發(fā)明專利]一種sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條、制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811044745.2
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN108982877A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡懷忠;王艷云
• 申請（專利權(quán)）人: 成都創(chuàng)宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 王霞

1.一種sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條，其特征在于：包括襯板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙由后到前依次粘貼吸附在所述襯板上；所述硝酸纖維素膜上劃有一根檢測線和一根質(zhì)控線；所述檢測線包被有由sICAM-1抗體與牛血清白蛋白偶聯(lián)的標(biāo)記物；所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG抗體；所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊有sICAM-1抗體熒光微球標(biāo)記物。

2.一種權(quán)利要求1所述試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備抗體的熒光微球標(biāo)記物：

①稀釋：將熒光微球用硼酸緩沖液稀釋，得到熒光微球稀釋溶液；

②活化：向所述熒光微球稀釋溶液中加入EDC和NHS，所述EDC和NHS的質(zhì)量比為1:2，離心得到沉淀一；

③一次復(fù)溶：向所述沉淀一中加入硼酸緩沖液復(fù)溶，混勻，得到復(fù)溶熒光微球；

④偶聯(lián)：向所述復(fù)溶熒光微球中加入sICAM-1抗體，室溫偶聯(lián)2h，得到偶聯(lián)物一；

⑤封閉：向所述偶聯(lián)物一中加入封閉液封閉過夜，離心得到沉淀二；

⑥二次復(fù)溶：向所述沉淀二中加入硼酸緩沖液，混勻，得到sICAM-1抗體熒光微球標(biāo)記物；

(2)制備硝酸纖維素膜檢測線和質(zhì)控線：

①抗體偶聯(lián)：向2％牛血清白蛋白溶液中加入sICAM-1抗體，偶聯(lián)后得到檢測線工作液；將羊抗鼠IgG抗體稀釋后得到質(zhì)控線工作液；

②噴涂：將檢測線工作液由左至右噴涂在硝酸纖維素膜表面形成檢測線，將質(zhì)控線工作液噴涂在檢測線前邊形成質(zhì)控線，烘干，即得到處理后的硝酸纖維素膜；

(3)熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的制備：

①Fusion5膜預(yù)處理：用磷酸緩沖液浸泡Fusion5膜，烘干，得到干燥后的Fusion5膜；

②稀釋：用磷酸緩沖液分別稀釋sICAM-1抗體熒光微球標(biāo)記物，得到熒光微球標(biāo)記物稀釋液；

③噴涂：將所述熒光微球標(biāo)記物稀釋液噴于干燥后的Fusion5膜上，烘干，得到處理后的熒光標(biāo)記物結(jié)合墊；

(4)樣品墊的處理：用PBS緩沖液浸泡樣品墊，烘干，得到處理后的樣品墊；

(5)試紙條的組裝：在襯板上依次搭接并粘貼處理后的樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和硝酸纖維素膜，再在酸纖維素膜的前邊搭接吸水紙，組裝后裁剪，即得到所述sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中①所用的熒光微球的固含量為1％。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中①、③和⑥所用的硼酸緩沖液的濃度為0.05mol/L，pH為6.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中⑤所用的封閉液由50mmol/L的乙醇胺溶液和10％的BSA溶液按體積比1:10混勻得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中①和②所用的磷酸緩沖液中含5％海藻糖、0.5％BSA和2％聚乙烯吡咯烷酮。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)中所用的PBS緩沖液中含2％EDTA、5％Tween-20、2％PVP和1％BSA。

8.一種權(quán)利要求1所述的sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條在制備判斷患者是否為狼瘡腎炎患者的檢測工具中的應(yīng)用。

9.一種權(quán)利要求1所述的sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條在制備判斷狼瘡腎炎患者為活躍期狼瘡腎炎患者、非活躍期狼瘡腎炎患者或未合并狼瘡腎炎的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的檢測工具中的應(yīng)用。

10.一種權(quán)利要求1所述的sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條在制備判斷狼瘡腎炎患者治療效果的檢測工具或制備狼瘡腎炎患者治療后的長期監(jiān)測工具中的應(yīng)用。