[發明專利]一種sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201811044745.2
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN108982877A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 胡懷忠;王艷云
• 申請（專利權）人: 成都創宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 王霞

本發明屬于狼瘡腎炎診斷技術領域，本發明公開了一種sICAM?1熒光免疫層析檢測試紙條、制備方法及其應用，試紙條包括由后到前依次粘貼吸附在襯板上的樣品墊、熒光標記物結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；硝酸纖維素膜上劃有一根檢測線和一根質控線；檢測線包被有由sICAM?1抗體與牛血清白蛋白偶聯的標記物；質控線包被有羊抗鼠IgG抗體；熒光標記物結合墊有sICAM?1抗體熒光微球標記物。本發明的試紙條對sICAM?1的檢測限達到0.05ng/mL，定量線性范圍0.1～10ng/mL，樣品無需任何前處理，檢測時間僅需6min，可實現人體尿液中sICAM?1的快速定量檢測，實現狼瘡腎炎的快速定量檢測，可廣泛應用于狼瘡腎炎患者的診斷、分型、指導治療和長期監測，極具實用價值。

技術領域

本發明屬于狼瘡腎炎診斷技術領域，具體涉及一種sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條、制備方法及其應用。

背景技術

系統性紅斑狼瘡(SLE)是我國常見的自身免疫性疾病，也是最常見的繼發性腎臟病，狼瘡腎炎(LN)是系統性紅斑狼瘡最常見的并發癥，至少50％以上的SLE患者臨床上有腎臟受累的證據。WHO根據狼瘡腎炎患者的腎小球病變的嚴重程度，將狼瘡腎炎分為I型(輕微系膜狼瘡腎炎)～VI型(嚴重硬化型狼瘡腎炎)，不同的分型具有不同的治療方案。從狼瘡腎炎發展為終末期腎病最主要的原因就是因為活躍期的狼瘡腎炎沒有被及時發現，導致了治療不及時，腎臟引發不可逆的腎小球硬化以及間質血管纖維化。目前，腎臟穿刺活檢術是判斷狼瘡腎炎患者的病情的“金標準”。然而，腎臟穿刺活檢術為有創性檢查，禁忌癥和并發癥較多，術后需絕對靜臥24h。由于腎臟穿刺活檢術的前述缺陷，容易導致患者錯過最佳治療時間，進一步發展為較為嚴重的狼瘡腎炎，同時也不適用于患者的長期檢測。由此可見，如果能開發一種無創、準確、快捷且安全的檢測工具，對于判定狼瘡腎炎的活躍期并給予及時治療以及狼瘡腎炎的長期監測有極大的促進作用。

目前對于狼瘡腎炎的研究表明，狼瘡腎炎的表征較多，機體內分子水平的變化廣泛但難以選擇出一種合適的標志物作為無創檢測工具的標志物。中國專利“一種以NCAM-1為檢測指標的雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測試劑盒及其應用”(中國發明專利公開號CN106932593B)和“一種以NCAM-1為檢測指標的金標試劑盒及其制備方法和應用”(中國發明專利公開號CN106885902B)以神經細胞粘附分子-1(NCAM-1)為標志物檢測患者是否在狼瘡腎炎活躍期。中國專利“以sICAM-1為檢測指標的檢測工具與檢測盒在檢測狼瘡腎炎中的應用”(中國發明專利申請號CN201711014980.0)，該專利中以細胞間粘附分子-1(sICAM-1)為標志物檢測患者是否在狼瘡腎炎活躍期。這三個專利都存在一個較大的缺陷，只能檢測受試者是否處理狼瘡腎炎活躍期，即只能對其進行定性檢測，無法進行定量檢測，無法對狼瘡腎炎患者的治療以及長期監測提供指導意義。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明目的在于提供一種可定量檢測且精度高的快速無創檢測工具，即一種sICAM-1熒光免疫層析檢測試紙條，本發明還提供了前述試紙條的制備方法及其應用。

ICAM-1(細胞間粘附分子-1)，又名CD54，是一種重要的細胞表面粘附分子，屬于免疫球蛋白超家族成員，在免疫應答啟動后的炎癥反應中有著重要的作用。ICAM-1的膜外部分可脫落為可溶性ICAM-1(sICAM-1)，從而在循環中被檢測出來。申請人在前期研究中發現，腎小球腎炎患者的血清中sICAM-1水平的升高與狼瘡腎炎的發病率呈正相關。

基于此，本發明選用sICAM-1作為標志物制作狼瘡腎炎的無創檢測工具，具體所采用的技術方案為：