[發(fā)明專利]一種金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811043235.3
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109042328A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設計）人: 王潔華;毛虹禹;宋秋芳
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津一同創(chuàng)新知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 12231
• 代理人: 陸藝

本發(fā)明公開了一種金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括以下步驟：(1)將新鮮金線蓮去葉的莖浸泡在多菌靈50％可濕性粉劑的水稀釋液中，取出，沖洗；切莖段，用乙醇水溶液浸泡，無菌水沖洗，氯化汞水溶液中浸泡，取出，放無菌水中，在恒溫搖床內(nèi)搖動，無菌水沖洗；(2)接種到誘導培養(yǎng)基，誘導出小苗；(3)接種到增殖培養(yǎng)基，得到長出2?3片葉子的金線蓮小植株；(4)切分成單株，接種到生根培養(yǎng)基，得到健壯成苗。本發(fā)明方法，使組織培養(yǎng)過程達到零污染，極大降低了金線蓮組培過程的根腐問題；本發(fā)明可使誘導率和生根率達100％，增殖率可達4～6倍，繁殖周期三個月左右。成苗健壯，大大縮短了培養(yǎng)周期，提高了金線蓮的產(chǎn)量及質量。

技術領域

本發(fā)明涉及一種金線蓮(Anoectochilus roxburghii)組培快繁的方法，屬于生物技術植物組織培養(yǎng)領域。

背景技術

金線蓮，又稱金線蘭、金絲草，蘭科開唇蘭屬植物，屬多年生珍稀中草藥植物。在民間具有廣泛的藥用價值，素有“藥王”、“神草”等美稱，主要分布在我國的福建、臺灣、廣西、廣東等地，具有清熱解毒、祛風利濕、滋陰潤肺及降血壓等功效，還可用于煲湯、茶飲中作為保健品食用。由于金線蓮藥用價值極高而且經(jīng)濟效益十分好，所以近年來金線蓮的野生資源被瘋狂采挖，資源日漸枯竭，而且金線蓮種子自然萌發(fā)率和繁殖率極低，生長緩慢，所以急需利用生物技術組織培養(yǎng)對金線蓮進行快速繁殖，保護瀕危野生資源。目前，金線蓮組培多以蒴果、莖段作為外植體，但在組培過程中，對于外植體的消毒效果不理想，污染率很高，而且蒴果種子發(fā)芽率很低，生長周期很長，并沒有達到快速繁殖的目的。本發(fā)明以莖段為外植體，改良了消毒技術及培養(yǎng)基配方，做到培養(yǎng)過程零污染，有效快速地提高了金線蓮種苗的繁殖速度和質量，可實現(xiàn)金線蓮優(yōu)質種苗的工廠化育苗，滿足生產(chǎn)上的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術不足，提供一種金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。

本發(fā)明采用如下技術方案：

一種金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括以下步驟：

(1)將新鮮金線蓮去葉的莖浸泡在多菌靈50％可濕性粉劑的1200～1500質量倍水稀釋液中6～8小時，取出，用自來水沖洗干凈；置于超凈工作臺，切莖段，用體積濃度75％的乙醇水溶液浸泡消毒30～40s，取出，無菌水沖洗，再置于質量濃度0.1％的氯化汞水溶液中浸泡10～12min，取出，置于無菌水中，并放到恒溫搖床內(nèi)，恒溫搖床的轉速為80～100rpm，溫度為24～26℃，搖動10-20min，再用無菌水沖洗4-6次；

(2)將步驟(1)獲得的外植體接種到誘導培養(yǎng)基，在24～26℃，光照強度500-1000lux，光照時間10h/d，培養(yǎng)，誘導出小苗；

(3)將步驟(2)獲得的小苗接種到增殖培養(yǎng)基，在24～26℃，光照強度500-1000lux，光照時間12h/d，培養(yǎng)，得到長出2-3片葉子的金線蓮小植株；

(4)將步驟(3)獲得的小植株切分成單株，接種到生根培養(yǎng)基，在24～26℃，光照強度1000-2000lux，光照時間12h/d，培養(yǎng)，得到健壯成苗。

誘導培養(yǎng)基的配方為：在MS培養(yǎng)基中加入萘乙酸，使終濃度為0.5mg/L，加入6-芐氨基腺嘌呤，使終濃度為3mg/L，加入蔗糖，使終濃度為30g/L，加入瓊脂，使終濃度為6g/L，pH＝5.8。

增殖培養(yǎng)基的配方為：在MS培養(yǎng)基中加入萘乙酸，使終濃度為0.5mg/L，加入6-芐氨基腺嘌呤，使終濃度為3mg/L，加入激動素，使終濃度為1mg/L，加入蔗糖，使終濃度為30g/L，加入瓊脂，使終濃度為6g/L，pH＝5.8。

生根培養(yǎng)基的配方為：在1/2MS培養(yǎng)基中加入萘乙酸，使終濃度為1mg/L，加入吲哚丁酸，使終濃度為1mg/L，加入蔗糖，使終濃度為30g/L，加入瓊脂，使終濃度為4g/L，加入活性炭，使終濃度為5g/L，加入香蕉，使終濃度為50g/L，pH＝5.8。