[發明專利]干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201811042701.6
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN108828109A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 劉輝宇;張瑞雪;鄒敏旭
• 申請（專利權）人: 質譜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓;尹妍

1.一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備內標品液：在內標品中加入純水，混勻直至完全溶解，真空干燥制成內標品液；

（2）制備工作液：采用萃取液萃取干血斑獲得干血斑萃取液，之后將步驟（1）制備的內標品液用干血斑萃取液稀釋成工作液；

（3）利用打孔器將空白濾紙片、質控品濾紙片打孔，放入V截底型96孔板中，之后在各孔中加入步驟（2）制備的工作液；將96孔板密封放入孵育振蕩器內孵育；

（4）振蕩結束后，取孵育溶液，采用串聯質譜法檢測樣本中胍基乙酸和肌酸濃度。

2.根據權利要求1所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）中，內標品成分為d3-肌酸和d2-胍基乙酸。

3.根據權利要求1所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）還包括，在干血斑萃取液中加入衍生化試劑3N鹽酸正丁醇，37℃下衍生化30分鐘，獲得衍生化干血斑萃取液。

4.根據權利要求1或3所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）中，用干血斑萃取液/衍生化干血斑萃取液按體積110倍稀釋成工作液；稀釋后內標品濃度為1μmol/L。

5.根據權利要求1所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述萃取液為體積含量50– 90%甲醇水溶液。

6.根據權利要求1所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）中，質控品包括低水平質控及高水平質控品，低水平質控品為3μmol/L胍基乙酸、50μmol/L肌酸；高水平質控品為8μmol/L胍基乙酸、300 μmol/L肌酸。

7.根據權利要求1所述的一種干血片中胍基乙酸和肌酸濃度的定量檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）中，將密封的V截底型96孔板置于孵育振蕩器內，在溫度為45±5℃，振蕩頻率為650–750轉/分的條件下，振蕩孵育45分鐘。