[發明專利]一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法

在審

• 申請號: 201811040147.8
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN109097324A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 馬亞東;黃宗堂;曹娜
• 申請（專利權）人: 豐澤康生物醫藥（深圳）有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將單核細胞培養在培養液中，放入培養箱中，待細胞達80％-90％融合后，洗棄未貼壁的細胞；加入質量濃度0.25％胰蛋白酶進行消化處理直到細胞收縮呈圓形，加入培養液終止消化反應，采用離心分離3-5分鐘，然后沉淀棄去上清液，沉淀物再加入培養液，吸管輕輕吹打細胞制成懸液；按1∶4比例傳代培養到培養板上，置于培養箱中培養，每2-4天更換一次培養液；

(2)待步驟(1)中的培養板上的細胞長滿后置于第一誘導培養液中進行誘導培養，兩天將第一誘導培養液更換成第二誘導培養液，在誘導培養兩天，然后將第二誘導培養液更換成培養液，誘導好的細胞在培養中繼續培養，每2-4天更換一次培養液。

2.根據權利要求1所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：步驟(1)和步驟(2)中所述的培養液為KSFM培養液，并且加入體積百分比為10％的胎牛血清。

3.根據權利要求1所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：步驟(1)中所述的培養箱的條件均為37℃、體積分數5％CO₂。

4.根據權利要求1所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：步驟(2)中，所述的第一誘導培養液，以含有體積百分比為10％胎牛血清的KSFM培養液為基礎培養液，還包括有0.2-0.5mmol/L異丁基甲基黃嘌呤、3-5mmol/L地塞米松、120-350nmol/L胰島素、0.5-1.2nmol/L三碘甲狀腺原氨酸、0.1-0.25mmol/L吲哚美辛，1-2μmol/L羅格列酮。

5.根據權利要求4所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：所述的第一誘導培養液，還含有50-100U/ml青霉素和50-100μg/ml鏈霉素。

6.根據權利要求1所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：步驟(2)中，所述的第二誘導培養液，以含有體積百分比為5％胎牛血清的KSFM培養液為基礎培養液，還包括6-10μg/ml胰島素，1-2nmol/L三碘甲狀腺氨酸，1-2μmol/L羅格列酮。

7.根據權利要求1到7任一項所述的一種提高單核細胞向多潛能細胞轉化的培養方法，其特征在于：步驟(2)所述的誘導好的細胞在培養中繼續培養，具體過程為，將誘導好的細胞接種轉移至含有培養液的6孔板中培養，初次傳代時間為6-8天，細胞生長至90％融合，按照1∶4的比例轉移轉移至9cm平皿中進行傳代培養，3-4天傳代一次，連續傳代5-7代后，獲得狀態良好的細胞，即為多潛能干細胞。