[發(fā)明專利]一種乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811038647.8
• 申請(qǐng)日: 2018-09-06
• 公開（公告）號(hào): CN109251997A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周勇;項(xiàng)周
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶高圣生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于它是按照以下步驟進(jìn)行的：

一、根據(jù)乙肝病毒DNA的C基因區(qū)域的保守序列設(shè)計(jì)引物

依據(jù)HBV C基因序列，通過DNAMAN軟件進(jìn)行序列比對(duì)，確定C基因特異序列區(qū)，在該區(qū)域設(shè)計(jì)特異性針對(duì)C的熒光定量引物序列如下：

上游引物HBVC-F，序列為：SEQ ID NO.1

下游引物HBVC-R，序列為：SEQ ID NO.2

二、標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建

依據(jù)步驟一設(shè)計(jì)的引物，以 XRV 全長(zhǎng) Sl 基因 cDNA 為模板，進(jìn)行熒光定量擴(kuò)增，繪制熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

若陰性對(duì)照品無 Ct 值，且無規(guī)則擴(kuò)增曲線，同時(shí)陽性對(duì)照品 Ct 值應(yīng)小于35.0 ，擴(kuò)增曲線典型，待測(cè)樣品的 Ct 值小于35.0 ，并且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，判斷為陽性，待測(cè)樣品無 Ct 值或者大于35并且無規(guī)則擴(kuò)增曲線，判斷為陰性。

2.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的一種乙型肝炎病毒SYBR Green Ⅰ 熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于所述的陽性對(duì)照品為包含HBV基因組的pBS-HBV-3.6 Ⅱ質(zhì)粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的一種乙型肝炎病毒SYBR Green Ⅰ 熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于所述的陰性對(duì)照品為PBS溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的一種乙型肝炎病毒SYBR Green Ⅰ 熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于熒光定量 PCR 的反應(yīng)體系為20μL，具體成分為：Power Up SYBR Green MasterMIX 10μL，HBVC-F 0.8μL，HBVC-R 0.8μL，模板1μL，無核酸酶水 7.4μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的一種乙型肝炎病毒SYBR Green Ⅰ 熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于熒光定量 PCR 的反應(yīng)程序?yàn)椋?0℃ 30s，95℃ 30s，(95℃ 15s，60℃ 30s)×40循環(huán)，60℃采集熒光信號(hào)。