[發明專利]一種濱麥基因組特異分子標記的應用

在審

• 申請號: 201811035249.0
• 申請日: 2018-09-06
• 公開（公告）號: CN108866237A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 吉萬全;杜欣;王艷珍;師曉曦;王長有;陳春環;田增榮;張宏
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種濱麥基因組特異分子標記的應用，將濱麥EST?STS引物標記進行PCR擴增，通過數據庫比中國春，普通小麥及華山新麥草，得到濱麥特異的序列。對本發明我們一共得到了濱麥的特異序列有1條。通過濱麥的特異序列，對開發新的分子標記，有效區分普通小麥及普通小麥與近緣物種濱麥的衍生后代奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于生物基因工程技術領域，涉及一種濱麥基因組特異分子標記的應用。

背景技術

濱麥(Leymusmollis(Trin)Hara.NsNsXmXm 2n＝28)屬禾本科(Poaceae)、小麥族(Triticeae)、大麥亞族(Hordinae)、賴草屬(LeymusHochst)的一個四倍體多年生小麥近緣種野生植物，主要生長在海岸和內陸干旱地區，分布于我國北方沿海地區，俄羅斯(遠東地區)、朝鮮、日本和北美。具有抗條銹病、白粉病、赤霉病、蚜蟲、抗旱、耐鹽堿、大穗多花等優良特性。上世紀五十年代，蘇聯科學家開始進行小麥和賴草屬包括濱麥的雜交，經胚拯救技術獲得了四倍體、六倍體小麥與濱麥的雜種，六十年代獲得了雜種的雙二倍體，七十年代獲得了硬粒小麥與濱麥的不完全雙二倍體。傅杰等創造了一系列具有優良農藝性狀的小麥-濱麥異源種質系，這些種質系仍帶有部分濱麥的特性，尤其是對條銹病的抗性。利用遠緣雜交、染色體工程等多種手段將濱麥中的多種類型優良基因導入到普通小麥中，創制攜帶濱麥優異性狀的小麥新種質，豐富小麥育種的遺傳基礎，挖掘抗病資源，創制豐富的種質材料，是進行小麥遺傳改良的有效途徑和重要方向。在濱麥遺傳物質向普通小麥轉移的過程中，濱麥遺傳物質的準確鑒定與追蹤是重要而迫切的工作。這些SSR標記和EST-STS標記均可在普通小麥-濱麥衍生后代第一部分同源群到第七部分同源群附加系中擴增出濱麥基因組的特異片段，為濱麥優異基因導入到普通小麥遺傳背景中的轉移提供了技術支持。

利用濱麥特異引物，擴增出濱麥特異的序列，為后續的分子標記開發工作奠定了基礎。因此，建立濱麥特異序列的主要技術為：利用SSR和EST-STS標記引物在普通小麥7182、濱麥及華山新麥草中擴增出對應的條帶，通過與參考基因組測序比對，得到濱麥特異序列。

縮略語和關鍵術語定義

SSR：簡單重復序列標記，SSR是以1～6個堿基為基本單位的串聯重復序列，其具有豐富的多態性并且隨機分布于整個基因組，根據重復單位大小、序列以及拷貝數的不同而呈現長度多態性。SSR技術根據重復序列的兩端序列設計特異性引物，通過PCR反應擴增出不同長度的PCR產物。

EST-STS：表達序列標簽，EST是指從不同組織來源的cDNA文庫中隨機挑選克隆進行5’端或3’端測序得到的長約300～400bp的基因表達序列片段，其數目則對應著其代表的基因表達的拷貝數，基因表達次數越多，相應的cDNA克隆越多，因此對克隆的測序分析可以了解基因的表達豐度。近年來由此形成的技術路線被廣泛應用于基因識別、繪制基因表達圖譜、尋找新基因等研究領域，并且取得了顯著成效。

發明內容

本發明的目的在于提供一種濱麥基因組特異分子標記引物在濱麥品種鑒定過程中的應用。將SSR和EST-STS標記引物進行擴增，便于區分濱麥與普通小麥7182和華山新麥草的不同條帶。

其具體技術方案為：

一種濱麥基因組特異分子標記引物在濱麥品種鑒定過程中的應用。

在濱麥(Leymusmollis(Trin)Hara.NsNsXmXm 2n＝28)現有的特異分子標記中挑選了17個特異性較好的EST標記進行了PCR擴增、瓊脂糖凝膠電泳、膠回收、連接轉化、測序等相關實驗來進一步驗證篩選出的濱特異性分子標記是否能區分濱麥和其他物種，尤其是濱麥與華山新麥草之間的區分，故而也可鑒定出濱麥和華山新麥草，有關報道和研究表明，濱麥和華山新麥草的親緣關系較近，濱麥的Ns基因組來自于華山新麥草含有濱麥外源染色體的濱麥和普通小麥的衍生后代。挑選的特異性標記如表1所示：

表1