[發明專利]一種刺參腸分離蛋白的提取方法

在審

• 申請號: 201811034370.1
• 申請日: 2018-09-06
• 公開（公告）號: CN109007233A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 吳海濤;郭曉坤;杜椅楠;韓佳潤;韓宜潼;肖琳
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: A23J1/04
• 分類號: A23J1/04
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

1.一種刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、刺參腸勻漿：將刺參腸去泥沙，洗凈，制備成刺參腸勻漿液；

S2、制備刺參腸脫脂粉：向步驟S1所述刺參腸勻漿液中加入正己烷/無水乙醇混合溶液，經過脫脂，抽濾、室溫風干、粉碎、過100目篩后得刺參腸脫脂粉；

S3、堿溶：將步驟S2所得刺參腸脫脂粉加入去離子水混勻，調至堿性pH值，攪拌，離心收集上清，得刺參腸分離蛋白提取液；

S4、酸沉：將步驟S3所得刺參腸分離蛋白提取液，調至酸性pH值，靜置，離心，收集沉淀；

S5、透析：將步驟S4所得沉淀溶于去離子水中，使用磷酸鹽緩沖液進行透析除鹽；

S6、干燥：將步驟S5所得產物進行冷凍干燥，得到刺參腸分離蛋白凍干粉。

2.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S1所述制備刺參腸勻漿的參數為：2000～3000rpm條件下勻漿3～5min，得到刺參腸勻漿液。

3.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S2所述脫脂具體為：向步驟S1所述刺參腸勻漿液中加入正己烷/無水乙醇混合溶液，在600～800rpm、4℃條件下攪拌5～7h進行脫脂，所述脫脂過程重復1～3次。

4.根據權利要求1或3所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S1所述正己烷/無水乙醇混合溶液中正己烷和無水乙醇的體積比為2～3:1。

5.根據權利要求1或3所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S1所述正己烷/無水乙醇混合溶液和刺參腸勻漿液的體積比為9～11:1。

6.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S3所述堿溶具體為：將步驟S2所得刺參腸脫脂粉按料液比1:10～35加入去離子水，混勻，用1mol/L NaOH調至pH8.0～11.5，4～60℃、300～500rpm條件下攪拌2～3h，3000～5000r/min離心20～30min，收集上清液，即刺參腸分離蛋白提取液。

7.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S4所述酸沉具體為：用1mol/L HCl將步驟S3所得刺參腸分離蛋白提取液調至pH2～4.6，靜置1～5h，8000～12000r/min離心10～30min，收集沉淀。

8.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，步驟S5所述透析具體為：將步驟S4所得沉淀以5～10mL/g的比例溶于去離子水中，用0.1mol/L NaOH調至pH6.8～7.0，溶解后的樣品裝入3～4KDa透析袋中，在20mmol/L pH7.4的磷酸鹽緩沖液中透析24～48h進行除鹽，期間更換4～6次透析液，每次透析液的量為樣品體積的10～20倍，透析過程在4℃進行。

9.根據權利要求1所述刺參腸分離蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、刺參腸勻漿：海參腸去泥沙，洗凈，2000rpm條件下勻漿5min，得到海參腸勻漿液；

S2、制備刺參腸脫脂粉：向步驟S1所述海參腸勻漿液中加入9倍體積的正己烷/無水乙醇混合溶液，進行脫脂，經抽慮，室溫風干，粉碎，過100目篩后，得到刺參腸脫脂粉；其中，所述脫脂為在600rpm，4℃條件下攪拌7h，所述脫脂重復1次；所述正己烷/無水乙醇混合溶液中，正己烷和無水乙醇的體積比為3:1；

S3、堿溶：以步驟S2所得海參腸脫脂粉為原料，按質量體積比1:20的料液比加入去離子水，混勻，用1mol/L NaOH調至堿性pH11.5，25℃300rpm條件下攪拌浸提2h，混合液放入離心機以4000r/min離心20min，收集上清液，即可得到含刺參腸蛋白的浸提液；

S4、酸沉：將步驟S3所得浸提液，用1mol/L HCl調至pH3.6，靜置3h，10500r/min下離心30min，收集沉淀；

S5、透析：將步驟S4所得沉淀以5mL/g的比例溶于去離子水中，用0.1mol/L NaOH調至pH6.8；溶解后的樣品裝入3.5KDa透析袋中，在20mmol/L pH7.4的磷酸鹽緩沖液中透析24h，期間更換4次透析液，每次透析液的量為樣品體積的10倍，整個透析過程在4℃進行；

S6、干燥：將步驟S5制備的產物在1Pa，-50℃條件下真空冷凍干燥72h，即可得到刺參腸分離蛋白凍干粉。