[發明專利]一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法

在審

• 申請號: 201811033779.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109270037A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 丁利;許宙;康震;清江;王季誠;李明安
• 申請（專利權）人: 寧波海歌電器有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 天津創智天誠知識產權代理事務所(普通合伙) 12214
• 代理人: 陳昌娟;田陽

本發明公開了一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，步驟一、制備上轉換納米材料并進行表面修飾，將金納米材料與適配體偶聯；步驟二、將待測樣品與適量功能化修飾的金納米粒子充分混合充分反應，再加入上轉換材料，靜置使得樣品中的重金屬和修飾有適配體互補鏈的上轉換材料競爭性識別適配體；步驟三、采用熒光儀器對上轉換材料的熒光值進行測定，利用與重金屬結合的金納米粒子無法淬滅上轉換材料的熒光，得出樣品中重金屬的含量；該方法解決了現有重金屬快速檢測技術存在的特異性差、穩定性差、耗材量大、造價昂貴等問題，同時提高了重金屬的檢測限，具有通用、高穩定性、高靈敏度、操作簡單等優點，滿足對工業品中各種重金屬的檢測要求。

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，涉及一種工業品中重金屬離散型生物傳感器檢測方法。

背景技術

重金屬的來源主要是由于其在開采、運輸、煉制、加工過程中產生的，能源資源如煤炭和石油的開采、煉制和使用中，也會有重金屬物質的存在和污染。這些重金屬物質進入大氣、水、土壤之中，然后隨著生物作用，不斷富集。重金屬污染與其他有機化合物的污染不同。重金屬具有富集性，很難在環境中降解。因此，重金屬污染會對人體健康產生極大的危害。

傳統檢測重金屬的方法主要有液相色譜、氣相色譜、氣液質聯用儀等。這些方法雖然具有靈敏度高、使用范圍廣等優點，但價格昂貴、處理復雜、實驗過程繁瑣費時，所用大量的有機試劑易污染環境，不能進行在線檢測。目前，免疫分析技術是重金屬快速檢測中應用最普遍的技術。然而，現有免疫檢測技術所用試劑盒和傳感器往往具有專一性；免疫標記物也存在不穩定、容易失活等缺點，限制了相關免疫分析技術的進一步發展。離散型生物傳感技術具有高靈敏度、操作簡單、響應快、無須標記與耗樣量少等優點。但與熒光分析法相比，仍然存在傳感芯片檢測專一性和成本高問題。因此，如何實現低成本、快速準確檢測工業品種不同重金屬已成為食品安全快速檢測領域熱點研究問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，在于解決現有重金屬快速檢測技術存在的特異性差、穩定性差、耗材量大、造價昂貴等問題，同時極大提高重金屬的檢測限，該方法具有通用、高穩定性、高靈敏度、操作簡單等優點，滿足對工業品中各種重金屬的檢測要求。

本發明的技術方案為：一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，利用離散型生物傳感檢測儀檢測熒光強度，間接測量工業品種重金屬的含量；包括以下步驟：

步驟一、取待檢測重金屬適配體溶液，即DNA1儲備液，加入金納米材料(AuNPs)溶液中，室溫下孵育得到A液；

步驟二、待檢測重金屬適配體DNA1的互補鏈DNA2儲備液，加入到上轉換熒光納米材料(UCNPs)溶液中，室溫下孵育得到B液；

步驟三、向步驟一中的A液中加入待測樣品，形成C液；

步驟四、向步驟三中的C液中加入B液，反應1-2h后，進行熒光檢測。

在上述技術方案中，在步驟一中，所述待檢測重金屬為Hg，DNA1序列為5′-NH2-TTCTTTCTTCCCCTTGTTTGTT-3′。

在上述技術方案中，在步驟一中，所述金納米材料按照下列步驟進行制備：

取97.5mL超純水以及2.5mLHAuCl₄溶液混合，升溫至沸騰；7～8min后，加2mL質量濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液，溶液由無色變為酒紅色后，繼續加熱10min，然后停止加熱，所得酒紅色液體即為13nm AuNPs。

在上述技術方案中，在步驟二中，所述上轉換熒光納米材料按照下列步驟進行制備：