[發明專利]一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法

在審

• 申請號: 201811033779.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109270037A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 丁利;許宙;康震;清江;王季誠;李明安
• 申請（專利權）人: 寧波海歌電器有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 天津創智天誠知識產權代理事務所(普通合伙) 12214
• 代理人: 陳昌娟;田陽

1.一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，按照下列步驟進行：

步驟一、取待檢測重金屬適配體溶液，即DNA1儲備液，加入金納米材料溶液中，室溫下孵育得到A液；

步驟二、待檢測重金屬適配體DNA1的互補鏈DNA2儲備液，加入到上轉換熒光納米材料溶液中，室溫下孵育得到B液；

步驟三、向步驟一中的A液中加入待測樣品，形成C液；

步驟四、向步驟三中的C液中加入B液，反應1-2h后，進行熒光檢測。

2.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟一中，所述待檢測重金屬為Hg，DNA1序列為5′-NH2-TTCTTTCTTCCCCTTGTTTGTT-3′。

3.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟一中，所述金納米材料按照下列步驟進行制備：取97.5mL超純水以及2.5mLHAuCl₄溶液混合，升溫至沸騰；7～8min后，加2mL質量濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液，溶液由無色變為酒紅色后，繼續加熱10min，然后停止加熱，所得酒紅色液體即為13nm AuNPs。

4.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟二中，所述上轉換熒光納米材料按照下列步驟進行制備：稱取YCl₃·6H₂O 0.236g、YbCl₃·6H₂O 0.077g、ErCl₃·6H₂O 0.007g加入到三頸燒瓶中，加入4mL OA和15mL 1-ODE，1500r/min磁力攪拌同時升溫至130℃，除去其中水蒸氣，進一步升溫至160℃，混合物形成均一溶液后自然冷卻至室溫；稱取0.13g NaOH和0.13g NH₄F溶于10mL甲醇中，將上述溶液加入到三頸燒瓶中攪拌30分鐘，使氯化物充分混合，除去甲醇，再升溫至300℃，加熱1h后，溶液自然冷卻，產品用乙醇從溶液中沉淀出來，清洗三次。

5.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟二中，所述上轉換熒光納米材料的表面修飾按照下列步驟進行：上轉換熒光納米材料表面進行PAA修飾：采用配體交換法制備PAA包裹的上轉換熒光納米材料:10mL PAA分散在乙醇溶液中，5mL OA-UCNPs分散在氯仿，將乙醇溶液加入到氯仿中，隔夜攪拌，反應結束后用乙醇清洗。

6.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，所述金納米材料與適配體的偶聯按照下列步驟進行：利用適配體取1mL制備得到的AuNPs溶液離心得到AuNPs沉淀，然后分散在1mL 10mmol/L pH7.4 PBS緩沖液中，加入10μL適配體溶液混合，反應結束后離心15min，棄上清，保留底部暗紅色的AuNPs-DNA1探針。

7.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的檢測體系構建按照下列步驟進行：依次配制不同濃度的重金屬標準溶液，取樣加入到比色皿中進行檢測，均記錄光譜圖；取各個濃度下的熒光光譜圖穩定值，繪制工作曲線，并進行多項式曲線擬合，獲得回歸曲線的方程。

8.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟四中，所述熒光檢測，按照下列步驟進行：

1)標準曲線的校正：將檢測儀調至校正界面，采用兩點校正法對標準曲線進行校正；

2)實際樣品的檢測：取C液加入到微量熒光比色皿中，使用熒光檢測儀開始進行檢測，讀取樣品中重金屬的濃度值。

9.根據權利要求1所述的一種工業品中重金屬離散型生物傳感檢測方法，其特征在于，在步驟四中，所述熒光檢測的波長為543nm。