[發明專利]一種人類哮喘風險基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811032806.3
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109055366A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 晏星;李倩;李雪梅;葉倫;程弘夏;陳剛
• 申請（專利權）人: 武漢康錄生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6858;C12Q1/6883
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 徐曉琴

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種人類哮喘風險基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用。所述試劑盒由分別用于擴增與人類哮喘風險相關的CYSLTR1和GSDML 2個基因多態性的PCR預混反應液、陽性對照品及陰性對照品組成，所述PCR預混反應液包含用于擴增各位點的特異性引物序列組、探針組和PCR反應液，所述特異性引物組由普通的外引物和帶熒光標簽的特異性的ARMs引物組成。本發明所述試劑盒用于檢測人類哮喘風險基因多態性具有靈敏度高、特異性高、操作簡便、結果可靠等優點，且能在1小時內完成檢測，并且結果判讀簡單客觀。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種人類哮喘風險基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術

哮喘是一種非常復雜的表型異質性疾病，是受遺傳因素和環境因素雙重影響的多基因遺傳病，到目前為止與哮喘相關的候選基因已超過200個，其中在多個人群中得到獨立重復實驗驗證的基因已達到43個。全基因組關聯研究(GWAS)報道顯示，17號染色體上的GSDMB和ORMDL3基因與哮喘的發病密切相關，其中位于GSDMB/ORMDL3基因CpG序列中的rs7216389(C>T)、rs4065275(A>G)和rs12603332(T>C)三個SNP位點均已證實和哮喘相關。其中rs7216389位于GSDMB基因，rs4065275和rs12603332位于ORMDL3基因，而位于GSDMB基因上進化保守的rs7216389(C>T)位點是哮喘最強烈的相關標記，在臨床檢測上更有意義。與成人相比，攜帶rs7216389位點T等位基因的兒童和青少年哮喘發作的風險和嚴重程度更高。

此外，除了遺傳因素，哮喘在發病過程由多種炎性細胞和多種細胞因子參與，研究已證實半胱氨酰白三烯受體CysLTR介導CysLTs半胱氨酰白三烯在哮喘的整個病理過程中發揮重要作用。CysLTR表達廣泛，存在于大部分哮喘炎癥細胞和結構細胞表面，其分子和蛋白水平的表達改變與呼吸道炎癥情況密切相關。CysLTR基因多態性與哮喘易患型及對治療藥物的敏感性存在一定的相關性。研究表明，CysLTR1的rs320995(927T>C)位點與哮喘的易感性相關，且C等位攜帶的男性哮喘患者具有更高的危險性。

目前臨床上主要采取以下四種方式檢測基因的多態性：

1.PCR-測序法

2.高分辨率溶解曲線法

3.芯片雜交法

4.Taqman-qPCR法

PCR-測序法靈敏度低，實驗耗時長，不適合臨床推廣；芯片雜交法，檢測靈敏度低并且特異性差，容易出現假陽性結果；高分辨率溶解曲線法對設備要求特殊，不適合臨床推廣，且檢測靈敏度不高。Taqman-qPCR法，檢測靈敏度高，但往往由于位點序列原因，導致檢測特異性不高，并且其通過Genotyping方法進行分型，對樣本數量和多態性分布有一定要求，不適合檢測突變頻率過低的位點。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，目的在于提供一種人類哮喘風險基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用。本試劑盒具有高靈敏度、高特異性、低成本高通量、操作簡便、實驗周期短等特點，可以快速精準的對人類基因組DNA中哮喘風險基因多態性進行檢測。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

一種人類哮喘風險基因多態性檢測引物組，所述引物組由普通的外引物和帶熒光標簽的特異性的ARMs引物組成，具體序列如下：

CYSLTR1-F1：5’-TTGTGGACTTCTCTTCCTTC-3’ SEQ ID NO.1

CYSLTR1-F2：5’-FAM-ATCCCTTGTCATCGTGGCTGTCTACTTTC-3’ SEQ ID NO.2