[發明專利]一種圖書館用的綠色無污染抗菌肽及其制備與應用

有效

• 申請號: 201811032542.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109232727B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 沈秀麗;李改英;趙團;丁立剛;杜志強
• 申請（專利權）人: 內蒙古科技大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;A01N47/44;A01P3/00;A01P1/00
• 代理公司: 武漢華強專利代理事務所(普通合伙) 42237
• 代理人: 溫珊姍

本發明公開了一種圖書館用的綠色無污染抗菌肽及其制備與應用，屬于生物技術及抗菌技術領域。本發明的抗菌肽Pc?Crustin 4與Pc?Crustin 5來源于淡水小龍蝦，氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1與SEQ ID NO.2所示，其制備包括如下步驟：提取淡水小龍蝦總RNA作為模板，進行反轉錄獲得cDNA；以cDNA作為模板進行PCR擴增獲得含抗菌肽編碼序列的核苷酸片段，擴增產物與表達載體通過酶切、連接、轉化，構建可表達重組抗菌肽的大腸桿菌工程菌，大腸桿菌工程菌通過誘導培養，表達出重組抗菌肽。本發明的抗菌肽(尤其是兩者復合)具有良好的抑菌、除菌活性，特別適用于圖書館的防霉、除菌。

技術領域

本發明涉及生物技術及抗菌技術領域，具體涉及來源于淡水小龍蝦(Procambarusclarkii)的抗菌肽及其制備方法與應用。

背景技術

圖書館是每一所高校必備的功能單位，主要為廣大師生提供紙質與電子期刊的借閱服務。因此，它也是各類書刊使用的密集空間。在圖書館這樣的公共場所里，具有兩個明顯的特點，第一，借閱人員的流動性很大，這樣給圖書館的環境衛生保持方面造成一定的壓力；第二，紙質書籍的借閱對象具有不確定性，其所處環境不可把控，因此，在書籍借閱的流通環節，書籍自身的衛生安全具有一定的隱患。此外，加上圖書館是一個相對密閉的空間，空氣的流動性較差，人員往來十分繁雜，這些因素疊加起來之后，會給圖書館的環境衛生造成一定的影響。尤其，對于各類常見的病原菌的控制，應該是圖書館環境衛生治理的重點。圖書館具有一個潔凈的環境，細菌、真菌等病原控制在安全范圍之內，一方面，對于借閱書籍、期刊的借閱者和在館內閱讀書籍、期刊的讀者的身體健康有利，另一方面，潔凈的圖書館環境對于書籍的收藏、保護工作也是一個重要保證。

現在對于圖書借閱、存儲過程中滋生的細菌、真菌在圖書館的書架、地面、角落等處繁殖之后，大多時候采取的是紫外線照射殺菌，這種方式有兩個弊端，第一，存在除菌時間的限制，必須閉館使用紫外線；第二，紫外線殺菌的時候會產生臭氧，污染館內空氣，對于人體健康存在安全風險。因此，開發一種既對環境沒有污染，又可以高效除菌的新型圖書館用的除菌劑，將會有良好的應用前景。

發明內容

本發明的首要目的在于提供來源于淡水小龍蝦(Procambarus clarkii)的新的抗菌肽。本發明的另一目的在于提供所述抗菌肽的制備方法。本發明的再一目的在于提供所述抗菌肽的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

來源于淡水小龍蝦(Procambarus clarkii)的新的抗菌肽，分別命名為Pc-Crustin 4與Pc-Crustin 5蛋白質，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1與SEQ ID NO.2所示，分別為127個和167個氨基酸殘基。

進一步地，淡水小龍蝦體內，所述抗菌肽Pc-Crustin 4與Pc-Crustin 5蛋白質基因的開放閱讀框對應的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，分別長384bp與504bp。

上述抗菌肽的制備方法，包括如下步驟：

(1)以提取的淡水小龍蝦總RNA作為模板，進行反轉錄PCR得到cDNA。

(2)以步驟(1)獲得的cDNA作為模板，進行PCR擴增獲得含上述抗菌肽編碼序列(開放閱讀框序列)的核苷酸片段。

(3)步驟(2)的擴增產物與原核表達載體通過酶切、連接、轉化，構建可表達重組抗菌肽的大腸桿菌工程菌。

(4)步驟(3)構建的大腸桿菌工程菌通過誘導培養，表達出重組抗菌肽。