[發明專利]一種圖書館用的綠色無污染抗菌肽及其制備與應用

有效

• 申請號: 201811032542.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109232727B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 沈秀麗;李改英;趙團;丁立剛;杜志強
• 申請（專利權）人: 內蒙古科技大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;A01N47/44;A01P3/00;A01P1/00
• 代理公司: 武漢華強專利代理事務所(普通合伙) 42237
• 代理人: 溫珊姍

1.一種抗菌肽，其特征在于：所述的抗菌肽為rPc-Crustin 4或rPc-Crustin 5，rPc-Crustin 4的氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示序列的26-127位氨基酸，rPc-Crustin 5的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示序列的25-167位氨基酸。

2.編碼權利要求1所述的抗菌肽的基因，其特征在于：

rPc-Crustin 4抗菌肽基因的開放閱讀框的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示序列的76-384位核苷酸；

rPc-Crustin 5抗菌肽基因的開放閱讀框的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示序列的73-504位核苷酸。

3.權利要求1所述的抗菌肽的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)以提取的淡水小龍蝦總RNA作為模板，進行反轉錄PCR得到cDNA；

(2)以步驟(1)獲得的cDNA作為模板，進行PCR擴增獲得含權利要求1所述抗菌肽編碼序列的核苷酸片段；

(3)步驟(2)的擴增產物與原核表達載體通過酶切、連接、轉化，構建可表達重組抗菌肽的大腸桿菌工程菌；

(4)步驟(3)構建的大腸桿菌工程菌通過誘導培養，表達出重組抗菌肽。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述的抗菌肽為rPc-Crustin 4時，反轉錄引物為：5’-cccggtggaccgctagacgg-3’；PCR擴增引物為：F1：5′-N_ncactatggcttctacggt-3′，R1：5′-N_nctagacgggggccttgca-3′；

其中，N_n由保護堿基和限制性內切酶酶切位點組成。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述的抗菌肽為rPc-Crustin 5時，反轉錄引物為：5’-caaagatcgggcacgatcaacaact-3’；PCR擴增引物為：F2：5′-N_ncatggctactacagtcac-3′，R2：5′-N_nctagacggtggctttgca-3′；

其中，N_n由保護堿基和限制性內切酶酶切位點組成。

6.權利要求1中抗菌肽rPc-Crustin 4和/或rPc-Crustin 5在制備抑菌劑或除菌劑中應用，其特征在于：抑菌或除菌的種類為金黃色葡萄球菌、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、溶藻弧菌、白色念珠菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、副溶血性弧菌、哈維氏弧菌、肺炎克雷伯氏菌、畢赤酵母。

7.一種抑菌劑或除菌劑，其特征在于：包含權利要求1中的抗菌肽rPc-Crustin 4和/或rPc-Crustin 5。

8.根據權利要求7所述的抑菌劑或除菌劑，其特征在于：包含rPc-Crustin 4和rPc-Crustin 5時，兩者質量比為1:1。

9.權利要求7或8所述的抑菌劑或除菌劑在圖書館防霉、除菌中的應用，其特征在于：防霉、除菌的種類為金黃色葡萄球菌、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、溶藻弧菌、白色念珠菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、副溶血性弧菌、哈維氏弧菌、肺炎克雷伯氏菌、畢赤酵母。