[發(fā)明專利]一種抗雄激素效應(yīng)的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811031591.3
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109061201B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢永忠;陳晨;馬朦朦;王天彩;李耘;許彥陽
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進(jìn)

本發(fā)明涉及抗雄激素效應(yīng)檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種抗雄激素效應(yīng)的檢測方法。所述檢測方法，包括：待檢測樣品中的抗雄激素和配體物質(zhì)競爭結(jié)合細(xì)胞中的雄性激素受體，通過測定與所述受體結(jié)合的所述配體物質(zhì)的量，確定所述抗雄性激素的效應(yīng)值，并以所述待檢測樣品對所述細(xì)胞的細(xì)胞毒活性結(jié)果為參考因素對所述效應(yīng)值進(jìn)行評估；所述配體物質(zhì)為所述雄性激素受體的配體；所述競爭結(jié)合在無血清反應(yīng)體系中進(jìn)行。該方法排除了血清中激素和生長因子及待檢測品細(xì)胞毒活性對熒光強度檢測的影響，可降低成本，減少實驗誤差，且簡化了實驗過程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗雄激素效應(yīng)檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種抗雄激素效應(yīng)的檢測方法。

背景技術(shù)

近年來，關(guān)于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental endocrinedisrupters,EEDs)對野生動物和人類內(nèi)分泌系統(tǒng)，尤其是對生殖內(nèi)分泌功能的影響問題十分受人關(guān)注，其中又以影響男性生殖健康問題為焦點。世界各地發(fā)現(xiàn)許多野生動物(包括哺乳動物、鳥類、兩棲類和魚類)出現(xiàn)生殖系統(tǒng)畸形、生育力下降或喪失、鳥類和兩棲類卵的孵化率降低、胚胎死亡率增加、幼體存活率降低、種群數(shù)目明顯減少等生殖退化現(xiàn)象。環(huán)境抗雄激素(environmental antiandrogen,EA)屬于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，與環(huán)境雌激素一樣，可以引起雄性生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能異常，現(xiàn)為尿道下裂等泌尿生殖道畸形、隱辜的發(fā)病率增高，雄性乳頭殘留，生殖器與虹門距離縮短，辜丸和附暈萎縮，精液量和精子數(shù)減少，精子活動度降低，精子畸形率升高等。

有必要對可能攜帶有環(huán)境抗雄激素作用的東西進(jìn)行檢測，為其安全性評價和危險度評定提供一定的科學(xué)依據(jù)。其中體內(nèi)檢測是常用的檢測手段，但其實驗繁瑣，時間和金錢成本高。而傳統(tǒng)的體外檢測方法，成本較高，干擾因素較多，檢測結(jié)果誤差大。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種抗雄激素效應(yīng)的檢測方法，所述的檢測方法排除了血清中激素和生長因子及待檢測品對熒光強度檢測的影響，可降低成本，減少實驗誤差，且簡化了實驗過程。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種抗雄激素效應(yīng)的檢測方法，包括：待檢測樣品中的抗雄激素和配體物質(zhì)競爭結(jié)合細(xì)胞中的雄性激素受體，通過測定與所述受體結(jié)合的所述配體物質(zhì)的量，確定所述抗雄性激素的效應(yīng)值，并以所述待檢測樣品對所述細(xì)胞的細(xì)胞毒活性結(jié)果為參考因素對所述效應(yīng)值進(jìn)行評估；

所述配體物質(zhì)為所述雄性激素受體的配體；

所述競爭結(jié)合在無血清反應(yīng)體系中進(jìn)行。

環(huán)境抗雄激素效應(yīng)測定的體外檢測過程中，血清中含有激素、生長因子以及培養(yǎng)基中殘留的待檢測品、酚紅等物質(zhì)，對于最終熒光值檢測的穩(wěn)定性均有較大的影響，必須排除其他添加物質(zhì)的影響。

為使競爭結(jié)合在無血清反應(yīng)體系中進(jìn)行，包括在競爭結(jié)合反應(yīng)時使用無血清培養(yǎng)基，以及細(xì)胞在競爭結(jié)合反應(yīng)前先除去原有帶血清的培養(yǎng)基。無血清條件下，待檢測品單獨作用于細(xì)胞，排除待檢測品作用于細(xì)胞時血清的干擾?，F(xiàn)有技術(shù)中，為排除反應(yīng)體系中血清的干擾，常用活性炭/葡聚糖處理其中的血清，但一方面在體系中引入了新的可能的干擾物，一方面成本較高。普通血清在4000-6000元/500ml，且成品的活性炭/葡聚糖處理胎牛血清在12000元/500ml以上。本發(fā)明提供的無血清反應(yīng)體系，可大大降低成本，及簡化操作。

在一些實施方式中，所述評估的方法包括：

比較相同待檢測樣品濃度下，所述配體物質(zhì)引起的效應(yīng)值與細(xì)胞存活率之間的關(guān)系，若細(xì)胞基本沒有死亡(細(xì)胞存活率≥90％)，則效應(yīng)值足以證明農(nóng)藥表現(xiàn)出了抗雄激素作用，若細(xì)胞死亡較多(細(xì)胞存活率＜90％)，則認(rèn)為待檢測樣品的細(xì)胞毒活性作用干擾了其對于雄激素受體的結(jié)合。

在一些實施方式中，所述待檢測品包括農(nóng)藥和農(nóng)藥代謝物；