[發明專利]一種抗雄激素效應的檢測方法有效
| 申請號： | 201811031591.3 | 申請日： | 2018-09-05 |
| 公開（公告）號： | CN109061201B | 公開（公告）日： | 2022-03-01 |
| 發明（設計）人： | 錢永忠;陳晨;馬朦朦;王天彩;李耘;許彥陽 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所 |
| 主分類號： | G01N33/74 | 分類號： | G01N33/74;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李進 |
| 地址： | 100000 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 激素 效應 檢測 方法 | ||
1.一種抗雄激素效應的檢測方法，其特征在于，包括：待檢測樣品中的抗雄激素和配體物質競爭結合細胞中的雄性激素受體，通過測定與所述受體結合的所述配體物質的量，確定所述抗雄性激素的效應值，并以所述待檢測樣品對所述細胞的細胞毒活性結果為參考因素對所述效應值進行評估；
所述待檢測品為烯酰嗎啉；
所述配體物質為二氫睪酮；
所述配體物質的濃度為0.8~1.2 nM；
所述競爭結合在無血清反應體系中進行；
所述待檢測品的體積量占總所述無血清反應體系體積的40%~60%；
所述細胞為MDA-kb2細胞；
所述反應體系為無血清的L-15培養基。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，檢測所述細胞毒活性的方法選自臺盼藍染色法、克隆形成法、ATP含量測定法、MTT、MTS、WST-1、XTT、CCK-8法中的一種或多種。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，檢測所述細胞毒活性的方法是MTT法，在進行檢測前，將所述細胞接種于含有血清的反應體系中進行培養；
所述培養的反應條件為在溫度為36~38℃，CO2濃度為4.5%~5.5%的條件下孵育22~26h；所述接種時的細胞密度為0.8×105~2×105 cells/mL。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述接種時的細胞密度為1×105cells/mL。
5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述血清在培養基中的濃度為9%~11%。
6.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，MTT與細胞接觸在無血清環境下進行。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，在所述競爭結合前，包括：將所述細胞接種于含有血清的反應體系中進行培養。
8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述培養的反應條件為在溫度為36~38℃，CO2濃度為4.5%~5.5%的條件下孵育22~26h。
9.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述接種時的細胞密度為0.8×105~2×105 cells/mL。
10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述接種時的細胞密度為1×105cells/mL。
11.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述血清在培養基中的濃度為9%~11%。
12.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述競爭結合的反應條件為在溫度為36~38℃，CO2濃度為4.5%~5.5%的條件下孵育22~26h。
13.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述測定以競爭結合后的經洗滌的細胞為檢測物。
14.根據權利要求13所述的檢測方法，其特征在于，所述洗滌采用PBS進行。
15.根據權利要求13所述的檢測方法，其特征在于，所述洗滌2~3次。
16.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述配體物質與所述受體的結合激活細胞表達標記物，通過檢測所述標記物的含量得到與所述受體結合的所述配體物質的量。
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