[發明專利]同時檢測含膠類藥材制品中多種動物源性成分的方法

在審

• 申請號: 201811031300.0
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN108828108A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 陳鴻玉;孫輝;殷帥;丁野;潘小紅;楊青;高潔瑩;龍凌云;童達;黃曉燕;李文莉;舒畢瓊;李玲
• 申請（專利權）人: 湖南省藥品檢驗研究院(湖南藥用輔料檢驗檢測中心)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 馬強;蔣尊龍

本發明公開了一種同時檢測含膠類藥材制品中多種動物源性成分的方法，包括以下步驟：制備對照混合溶液：取阿膠、黃明膠和龜甲膠3種對照藥材混合，用碳酸氫銨溶液提取、定容，將提取后的提取液用胰蛋白酶進行酶水解，得到對照混合溶液；按同樣的方法制備供試品溶液；用超高效液相色譜?二級串聯質譜法分別對對照混合溶液和供試品溶液進行測試，對膠類藥材制品中驢源性成分、龜源性成分及摻入的牛源性成分同時進行定性和定量分析。本發明可以同時檢測膠類藥材制品中多種動物源性成分，準確度高、專屬性強，能夠控制膠類藥材按處方量投料，保障制品的質量。

技術領域

本發明涉及一種同時檢測含膠類藥材制品中多種動物源性成分的方法。

背景技術

膠類藥材是指由動物的皮、骨骼等經過特殊工藝加工而成的膠，多數具有滋陰補血的功效，如阿膠、龜甲膠等。阿膠為馬科動物驢的干燥皮或鮮皮經煎煮、濃縮制成的固體膠，故阿膠來源于驢。龜甲膠為龜甲經水煎煮、濃縮制成的固體膠，故龜甲膠來源于龜。膠類藥材因生產用的動物原料有限，且飼養成本高，為降低成本，出現用低價易得的牛皮膠替代阿膠、龜甲膠等膠類藥材的市場現狀，影響了膠類藥材及其制品的質量。膠類藥材主要成分為膠原蛋白，利用蛋白質或氨基酸通用型檢測方法，如電泳法、高效液相色譜法、薄層色譜法等方法，專屬性差，不能很好地鑒別不同膠類藥材的動物源性成分。PCR技術是鑒定動物源性比較成熟的技術，但膠類藥材是經高溫煎煮后，DNA被嚴重破壞，殘存留極地，且制品中還有其它多種藥味，目前，PCR技術未能用于膠類藥材及其制品的檢測。

膠類藥材制品包括含膠類藥材的中成藥和保健品，膠類藥材制品與單味膠類藥材相比，存在藥味多、成分復雜，以及處方工藝不同等特征，因此測定膠類藥材制品中膠類成分的檢測技術手段有限。目前主要是采用凱氏定氮法測定總氮量，采用薄層色譜法、高效液相色譜法和高效液相質譜聯用法對游離或水解后的氨基酸成分進行測定，這些檢測方法主要測定含氮量和氨基酸含量。氮是合成蛋白質基本元素，蛋白質是由不同氨基酸序列組成，膠類藥材主要成分為動物類膠原蛋白，膠原蛋白具有相似的化學性質，其組成膠原蛋白的氨基酸種類也具有相似性，采用測定氮和氨基酸的檢測方法，專屬性不強，無法區分不同來源的動物源性成分，不能判定制品中膠類成分的真實質量，需建立專屬性強的檢測方法，測定制品中膠類成分。

膠類藥材主要為膠原蛋白成分，目前采用常規檢測大分子蛋白質技術均沒有尋找到不同動物源膠原蛋白特有成分，以膠原蛋白特有成分作為控制指標的方法是不可行的。酶切技術和超高效液相色譜質譜串聯技術是當前用于蛋白質分析比較成熟的方法，利用酶切技術將膠類藥材進行特異性酶切，再采用超高效液相色譜質譜串聯技術對酶解后的樣品進行分析，對動物源性成分特有的肽段進行歸屬，通過統計學模型尋找到阿膠4個雙電荷特征離子，分別為618.7、469.2、765.8、539.8；龜甲膠3個雙電荷特征離子745.9、631.3、758.4；黃明膠4個雙電荷特征離子，分別為747.3、641.3、790.8、604.8，最后選擇信號穩定、響應值高的母離子m/z 539.8、m/z 631.3和m/z 641.3作為測定離子。最后在此基礎上，2015年版《中國藥典》收載了以m/z 539.8→923.8、612.4離子對作為阿膠特征成分的鑒別方法和以m/z 631.3→546.4、921.4離子對作為龜甲特征成分的鑒別方法；國家食品藥品監督管理局也已經批準以m/z 641.3→726.2、783.3作為牛源成分來源的補充檢驗方法，故阿膠、龜甲和黃明膠特征離子作為阿膠藥材鑒別的方法是可行的。然而，《中國藥典》中阿膠和龜甲膠質量標準僅限于鑒別，該方法僅限于鑒別藥材中的驢源性成分和龜源性成分，而含阿膠和龜甲膠制品均未收載此類方法。在日常檢驗工作中發現，驢源性成分和龜源性成分含量僅1％也能被檢測，并判定為合格，用該方法檢測仍然不能判定阿膠和龜甲膠質量的優劣，且針對其它皮類如牛皮替代投料情況，未同時測定。