[發明專利]金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法

在審

• 申請號: 201811031195.0
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109336966A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 曲文娟;馮依婷;張欣欣;馬海樂
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，屬于天然蛋白提取技術領域。首先金槍魚皮的脫脂脫雜蛋白處理；然后在乙酸溶液體系中，采用脈沖超聲輔助方法加速用胃蛋白酶酶解膠原蛋白的提取過程；最后脈沖超聲結束后，經離心、純化以及干燥制得螺旋結構Ι型金槍魚皮膠原蛋白。本發明通過脈沖超聲輔助酶提加速膠原蛋白的提取過程，最終制備獲得螺旋結構Ι型金槍魚皮膠原蛋白，操作工藝簡單易行，可大大提高金槍魚皮膠原蛋白的提取率，能耗較低。

技術領域

本發明涉及天然蛋白提取技術領域，特指一種以金槍魚皮為原料、采用脈沖超聲輔助酶解提取膠原蛋白的方法。

背景技術

目前隨著國內外金槍魚消費量的逐年上升，金槍魚加工量越來越大，加工企業產生大量的金槍魚皮副產物，卻未被充分開發利用。就目前的情況來看，金槍魚皮等水產品加工下腳料大多被直接丟棄，不僅造成嚴重的資源浪費而且對環境有污染。因此，研究充分利用金槍魚皮資源的方法，開發高附加值的產品，既能夠進一步提高金槍魚的經濟價值，又能夠有效減少資源浪費，對金槍魚產業鏈的拓展具有重要意義。

水產動物特別是其魚皮等加工廢棄物中含有十分豐富的膠原蛋白。膠原蛋白是生物體內一種重要的蛋白質，能夠支撐和保護機體內臟器官，具有極高的藥用價值和營養價值。以金槍魚皮為原料提取得到的膠原蛋白具備陸生動物源膠原所缺少的許多優點，如低過敏性、低抗原性等，而且可以避免畜禽疾病的影響和宗教禁忌，可在食品、醫學、材料等方面廣泛應用。

對金槍魚皮的利用是勢在必行，而傳統的金槍魚皮膠原蛋白提取工藝-鹽提、酸提、酶提法無法做到資源利用的最大化，存在提取所需時間長且提取效率不高的不足。目前有研究報道采用超聲波輔助提取技術提高膠原蛋白提取率，具有一定的優勢。超聲波可以通過空化產生高剪切力和微氣泡來提高表面侵蝕，破碎和傳質，提取率高、提取速度快，對提取材料的影響較小，有助于改進水產品資源的生物活性成分的提取。但目前超聲促進金槍魚膠原蛋白提取一般都是采用連續超聲，然而，據目前研究的文獻報道來看，還未有將先進的脈沖超聲模式應用于金槍魚皮膠原蛋白的制備研究上。

發明內容

為解決上述問題，本發明在金槍魚皮膠原蛋白酶提制備過程中引進脈沖超聲技術，可以充分利用脈沖超聲輔助提取短時間、高產量、低溫升等顯著優點，高效提取熱敏生物活性的金槍魚皮膠原蛋白。

本發明所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，按照下述步驟進行：

(1)金槍魚皮的脫脂脫雜蛋白處理：將經過4℃解凍、清洗、瀝干、切碎等一系列處理的金槍魚皮與乙醚以1:3(mg/mL)的比例浸泡脫脂72h，并更換乙醚溶劑2次，魚皮的脂肪殘留率為0.12％。將脫脂后的魚皮與0.25M NaOH溶液以1:30(mg/mL)的比例在4℃下脫雜蛋白3h。用蒸餾水充分洗滌至中性，低溫干燥，備用。

(2)脈沖超聲輔助酶提金槍魚皮膠原蛋白：將步驟(1)處理后的魚皮原料以料液比1:200(mg/mL)浸泡于0.5M乙酸溶液中，于冰浴中均質5min，進行脈沖超聲處理，其中頻率為28kHz，功率為100～400W，占空比為10％～90％，時間為10～50min。超聲結束后加入0.06％(W/V)1800U/g的胃蛋白酶(pH＝2)，4℃酶提48h，于4℃下8000rpm離心45min，上清液即為脈沖超聲輔助酶提膠原蛋白的粗提液。

(3)金槍魚皮膠原蛋白制備：將步驟(2)制得的粗提液加NaCl至0.9M鹽析過夜，6000rpm離心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，8000rpm離心45min，所得上清液加NaCl至2.4M鹽析過夜，6000rpm離心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，透析3天，真空冷凍干燥獲得金槍魚皮膠原蛋白。

其中步驟(2)中所述的超聲功率為：100、200、300、400W，優選為100W。

其中步驟(2)中所述的超聲占空比為：10％(1s/9s)、30％(3s/7s)、50％(5s/5s)、