[發明專利]金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法

在審

• 申請號: 201811031195.0
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109336966A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 曲文娟;馮依婷;張欣欣;馬海樂
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：

(1)金槍魚皮的脫脂脫雜蛋白處理：將經過4℃解凍、清洗、瀝干、切碎等一系列處理的金槍魚皮與乙醚以1:3(mg/mL)的比例浸泡脫脂72h，并更換乙醚溶劑2次，魚皮的脂肪殘留率為0.12％；將脫脂后的魚皮與0.25M NaOH溶液以1:30(mg/mL)的比例在4℃下脫雜蛋白3h；用蒸餾水充分洗滌至中性，低溫干燥，備用；

(2)脈沖超聲輔助酶提金槍魚皮膠原蛋白：將步驟(1)處理后的魚皮原料以料液比1:200(mg/mL)浸泡于0.5M乙酸溶液中，于冰浴中均質5min，進行脈沖超聲處理，其中頻率為28kHz，功率為100～400W，占空比為10％～90％，時間為10～50min；超聲結束后加入0.06％(W/V)1800U/g的胃蛋白酶(pH＝2)，4℃酶提48h，于4℃下8000rpm離心45min，上清液即為脈沖超聲輔助酶提膠原蛋白的粗提液；

(3)金槍魚皮膠原蛋白制備：將步驟(2)制得的粗提液加NaCl至0.9M鹽析過夜，6000rpm離心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，8000rpm離心45min，所得上清液加NaCl至2.4M鹽析過夜，6000rpm離心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，透析3天，真空冷凍干燥獲得金槍魚皮膠原蛋白。

2.根據權利要求1所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲功率為：100、200、300、400W。

3.根據權利要求1所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲占空比為：10％(1s/9s)、30％(3s/7s)、50％(5s/5s)、70％(7s/3s)、90％(9s/1s)。

4.根據權利要求1所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲時間為：10、20、30、40、50min。

5.根據權利要求2所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲功率為：100W。

6.根據權利要求3所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲占空比為：70％(7s/3s)。

7.根據權利要求4所述的金槍魚皮膠原蛋白的脈沖超聲輔助酶提制備方法，

其特征在于其中步驟(2)中所述的超聲時間為：40min。