[發(fā)明專利]蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034及其檢測試劑、方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811030827.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN108977554B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳艷;皮勁松;梁振華;潘愛鑾;張昊;蒲躍進;申杰;杜金平;孫靜
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/113
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034及其檢測試劑、方法與應(yīng)用；本發(fā)明的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034對應(yīng)的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示；本發(fā)明所述蛋鴨環(huán)狀RNA的熒光定量PCR檢測引物對及檢測試劑盒，所述檢測引物對如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；本發(fā)明還提供了所述蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034過表達載體及其構(gòu)建方法；還提供了所述的蛋鴨環(huán)狀RNA及過表達載體作為分子標(biāo)志物在鑒別蛋鴨卵泡發(fā)育情況、檢測蛋鴨卵泡顆粒細胞中細胞增殖分化狀況中的應(yīng)用。對研究蛋鴨繁殖性狀的遺傳本質(zhì)及提高蛋鴨繁殖力具有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034及其檢測試劑、方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼RNA，其由一種共價鍵形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)的RNA分子，不受RNA外切酶影響，表達更穩(wěn)定、不易降解。已有研究表明，circRNA大部分屬于非編碼RNA，主要由外顯子衍生而來，且circRNAs在動物中具有組織特異性。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，在多種生物細胞和組織中，有超過10％的表達基因能夠產(chǎn)生circRNAs。在功能上，近年來的研究表明circRNA具有較高的豐富性，富含microRNA(miRNA)的結(jié)合位點，在細胞中起到miRNA海綿作用，可以通過吸附miRNA，競爭性抑制miRNA與靶基因結(jié)合的能力。

卵泡發(fā)育與蛋鴨的產(chǎn)蛋性能密切相關(guān)，直接影響蛋鴨的產(chǎn)蛋量。已有研究表明，禽類卵泡發(fā)育是極為復(fù)雜的生物學(xué)過程，目前人們已對家禽的卵泡發(fā)育模式有了一定的了解，但是作為決定產(chǎn)蛋量的重要因素，卵泡發(fā)育的具體調(diào)控機理仍需深入研究。顆粒細胞的生長狀況直接影響到卵泡的發(fā)育情況，卵泡顆粒細胞可以分泌性腺激素及生長因子調(diào)控卵泡膜細胞和卵母細胞的生長、分化和成熟，同時也精確的調(diào)控卵泡的生長發(fā)育。因此，保障良好的卵泡發(fā)育、掌握卵泡發(fā)育的調(diào)控規(guī)律有助于進一步提高蛋鴨的繁殖力，對于提高蛋鴨生產(chǎn)性能具有重要意義。然而目前關(guān)于蛋鴨組織特異性環(huán)狀RNA的研究尤其是蛋鴨卵泡環(huán)狀RNA及其調(diào)控機制的研究尚未見報道。因此，迫切需要提高蛋鴨卵泡環(huán)狀RNA研究水平和完整性，從而為蛋鴨基因組及其非編碼RNA的研究提供科學(xué)的理論依據(jù)，以便更為深入了解蛋鴨卵泡發(fā)育的調(diào)控機制，為提高蛋鴨的繁殖性能提供理論支撐。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，提供了蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034及其檢測試劑、方法與應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034，所述蛋鴨環(huán)狀RNAcirc_13034對應(yīng)的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

本發(fā)明的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034是申請人基于前期完成的蛋鴨卵泡組織全轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果，通過對不同發(fā)育時期兩組卵泡組織樣品的測序結(jié)果進行大量生物信息學(xué)分析篩選獲得的一個新的環(huán)狀RNA分子。申請人將其命名為蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034，所述蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034對應(yīng)的cDNA序列的長度為1068bp。

在本發(fā)明的第二方面，提供了所述的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034作為分子標(biāo)志物在用于鑒別蛋鴨卵泡發(fā)育情況中的應(yīng)用。

經(jīng)過研究，申請人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034分子在蛋鴨白卵泡中的表達量顯著高于蛋鴨黃卵泡中的表達量，由此本發(fā)明的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034可作為分子標(biāo)志物用于鑒別蛋鴨卵泡的發(fā)育情況。并且，該環(huán)狀RNA具有閉合的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不容易受核酸外切酶攻擊，在生物體內(nèi)非常穩(wěn)定，是理想的分子標(biāo)志物。

在本發(fā)明的第三方面，提供了所述的蛋鴨環(huán)狀RNA circ_13034作為分子標(biāo)志物在用于檢測蛋鴨卵泡顆粒細胞中細胞增殖分化狀況中的應(yīng)用。