[發明專利]蛋鴨環狀RNA circ_13034及其檢測試劑、方法與應用

有效

• 申請號: 201811030827.1
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN108977554B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 吳艷;皮勁松;梁振華;潘愛鑾;張昊;蒲躍進;申杰;杜金平;孫靜
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/113
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

1.一種蛋鴨環狀RNA circ_13034，其特征在于，所述蛋鴨環狀RNA circ_013034對應的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

2.權利要求1所述的蛋鴨環狀RNAcirc_13034作為分子標志物在鑒別蛋鴨卵泡發育情況中的應用。

3.如權利要求1所述的蛋鴨環狀RNAcirc_13034作為分子標志物在檢測蛋鴨卵泡顆粒細胞中細胞增殖分化狀況中的應用。

4.一種如權利要求1所述的蛋鴨環狀RNA circ_13034基因的熒光定量PCR檢測引物對，其特征在于，包括：

上游引物RNA circ_13034-F，如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

下游引物RNA circ_13034-R，如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。

5.一種如權利要求1所述的蛋鴨環狀RNA circ_13034基因的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，包括：權利要求4所述的熒光定量PCR檢測引物對。

6.如權利要求5所述檢測試劑盒，其特征在于，還包括RNA提取試劑、逆轉錄反應體系和熒光定量PCR反應體系，其中所述熒光定量PCR反應體系包括THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix、ddH₂O、所述逆轉錄反應體系逆轉錄得到的cDNA以及權利要求4所述的檢測引物對。

7.如權利要求6所述檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光定量PCR反應體系如下：THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix 10μL， 10μ M蛋鴨環狀RNA circ_13034上游引物0.4μL，10μM蛋鴨環狀RNA circ_13034下游引物0.4μL，待檢測cDNA模板2.0μL，ddH₂O 7.2μL，總體積20μL。

8.一種權利要求5-7任一所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、提取待檢測樣品中的RNA，首先進行環狀RNA的酶切，然后進行逆轉錄得到cDNA；

步驟2、利用權利要求4中所述的引物對，對待檢測樣品cDNA進行熒光定量PCR擴增，采用2^-ΔΔCT方法計算并獲得不同來源卵泡樣本中環狀RNA circ_13034基因的相對表達量；

步驟3、根據PCR擴增產物及基因相對表達量判斷待檢測樣本是否存在蛋鴨環狀RNAcirc_13034基因及其表達情況。

9.如權利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步驟2中的熒光定量PCR反應條件為，98℃，10s；94℃，15s，54℃，15s，60℃，15s，40個循環；95℃，10s；65℃，60s，97℃，1s，1個循環。

10.一種蛋鴨環狀RNA circ_13034基因過表達載體，其特征在于，所述載體包括權利要求1所述蛋鴨環狀RNA circ_13034對應的cDNA序列。