[發(fā)明專利]一種蛋白粉的電化學(xué)指紋圖譜檢測方法

有效

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• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109115847B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡俊平;李超群;朱曉敏;田芳
• 申請（專利權(quán)）人: 邯鄲學(xué)院
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N1/28
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• 代理人: 暫無信息

1.一種蛋白粉的電化學(xué)指紋圖譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、建立蛋白粉化學(xué)成分的電化學(xué)指紋圖譜：

ⅰ、將同一品牌同一種蛋白粉不同批次的蛋白粉作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，在60-80℃條件下，干燥1-6h，然后自然冷卻；

ⅱ、準(zhǔn)確稱取0.2-1.2g干燥冷卻后的蛋白粉并置于消解罐中，并向其中加入混合溶液，再向混合溶液中加入非離子表面活性劑和復(fù)合酶，然后將消解罐置于微波消解儀中進行消解，采用功率1200W，進行第一次升溫，2min內(nèi)升溫至25-35℃，并在溫度為35℃的條件下駐留2min；進行第二次升溫，在1min內(nèi)其溫度由35℃升至50℃，并在溫度為50℃的條件下駐留30-40min；

其中：

所述混合溶液由0.1mol/L氯化銨與0.1mol/L氨水按2：1比例混合攪拌制成；

所述表面活性劑選用椰油基葡糖苷或鯨蠟硬脂基葡糖苷，且表面活性劑的加入量為混合溶液總質(zhì)量的3-5%；

所述復(fù)合酶的加入量為3000-8000U/g蛋白粉，且復(fù)合酶由木瓜蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、氨肽酶和二肽酶按照質(zhì)量比2:2:1:1混合而成；

ⅲ、將消解罐從微波消解儀中取出，并將消解罐中的混合液體轉(zhuǎn)至帶有磁力攪拌器的恒溫水浴杯中，相繼加入12mL濃度為0.080mol/L的硫酸錳溶液、8mL濃度為4mol/L的硫酸溶液和5mL濃度為1mol/L的丙酮溶液作為反應(yīng)底液；

ⅳ、開啟磁力攪拌器，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為450-600r/min，在另一個恒溫水浴杯中加入10mL濃度為0.40mol/L的溴酸鉀溶液，在37℃的溫度下恒溫靜置10min后，將溴酸鉀溶液倒入反應(yīng)底液；

ⅴ、用電化學(xué)工作站記錄電壓-時間曲線，以繪制出蛋白粉的電化學(xué)指紋圖譜；

B、檢測樣品：

取待檢測的蛋白粉樣品，使用與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同的前處理條件，得出檢測樣品的圖譜，將兩者的指紋圖譜用直接觀察并且以O(shè)rigin軟件分析作為定性依據(jù)；

C、重現(xiàn)性考察：

取待檢測的蛋白粉樣品，測定其圖譜，測得的電化學(xué)指紋圖譜的各種特征參數(shù)的RSD＜3％，表明所述方法具有很好的重現(xiàn)性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛋白粉的電化學(xué)指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述電化學(xué)指紋圖譜檢測方 法包括如下步驟：

A-1、標(biāo)準(zhǔn)樣品選擇：

同一產(chǎn)地同一品牌的蛋白粉，以4-8個批次為標(biāo)準(zhǔn)樣品；

A-2、電化學(xué)指紋圖譜法分析條件：

檢測儀器：瑞士萬通204N型電化學(xué)工作站，TRANSFORM800微波消解儀、HH-501型超級恒溫水浴鍋，85-2A型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器，213型金屬鉑電極和217型甘汞電極；

A-3、電化學(xué)指紋圖譜信息參數(shù)分析：

用Origin軟件繪制電壓-時間（E-t）曲線，即獲得蛋白粉電化學(xué)指紋圖譜以及其特征參數(shù)；

其中，圖譜參數(shù)包括：

誘導(dǎo)時間(s)：從加入試劑到振蕩發(fā)生的時間；

振蕩壽命(s)：振蕩開始到振蕩結(jié)束的時間；

最大振幅(v)：振蕩過程中相鄰電位正峰和負(fù)峰之間的最大差值；

振蕩周期(s)：振蕩過程中出現(xiàn)相鄰峰的時間；

最高電位(v)；振蕩曲線的電位最高值；

最低電位(v)；振蕩曲線的電位最低值；

平衡電位(v)；體系達到熱力學(xué)平衡時的電位；

測得的電化學(xué)指紋圖譜的各種特征參數(shù)的RSD＜3％；

B、檢測樣品：

取待檢測的蛋白粉樣品，使用與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同的條件檢測，得出檢測樣品的指紋圖譜，將兩者的指紋圖譜直接觀察并且以O(shè)rigin軟件分析作為定性依據(jù)，如果兩者的圖譜特征參數(shù)的RSD＜10％，可認(rèn)為是同一產(chǎn)品，若RSD＞10％則認(rèn)為是非同一產(chǎn)品；

C、重現(xiàn)性考察：

取6份待測蛋白粉樣品，測定其圖譜并進行考察。