[發明專利]一種微量DNA樣品高通量測序文庫的構建技術有效
| 申請號： | 201811025369.2 | 申請日： | 2018-09-04 |
| 公開（公告）號： | CN109023537B | 公開（公告）日： | 2021-10-08 |
| 發明（設計）人： | 趙小東;康亞妮;胡叢霞;徐偉 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;馬莉華 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 微量 dna 樣品 通量 序文 構建 技術 | ||
1.一種微量DNA樣品高通量測序文庫的構建方法，其特征在于，包括步驟：
(a)提供第一混合物，所述第一混合物包括DNA片段和輔助核酸片段，所述DNA片段包括來源于細胞基因組DNA；
(b)向所述第一混合物中的DNA片段和輔助核酸片段兩端添加接頭，從而得到含末端帶有接頭的DNA片段和輔助核酸片段的第二混合物；
(c)用特異性抗體捕獲富集所述的第二混合物中的末端帶有接頭的DNA片段和輔助核酸片段；
(d)用特異性引物對上一步驟中經捕獲富集的DNA片段和輔助核酸片段進行擴增，從而獲得含擴增產物的第三混合物；
(e)用特異性針對所述輔助核酸片段的核酸酶對所述第三混合物進行處理，從而消化所述輔助核酸片段，從而獲得含有富集所述DNA片段的擴增產物的第四混合物；
其中步驟(a)中所述DNA片段來自10-120pg 核酸或3-30個細胞，所述輔助核酸片段為經T→U變換的λDNA。
2.一種微量DNA樣品高通量測序文庫的構建方法，其特征在于，包括步驟：
(a)提供第一混合物，所述第一混合物包括DNA片段和輔助核酸片段，所述DNA片段包括來源于細胞基因組DNA；
(b)向所述第一混合物中的DNA片段和輔助核酸片段兩端添加接頭，從而得到含末端帶有接頭的DNA片段和輔助核酸片段的第二混合物；
(c)用特異性抗體捕獲富集所述的第二混合物中的末端帶有接頭的DNA片段和輔助核酸片段；
(d) 用特異性酶去除所述輔助核酸片段；
(e)用特異性引物對上一步驟中經捕獲富集的DNA片段進行擴增，從而獲得含擴增產物的第三混合物；
其中步驟(a)中所述DNA片段來自10-120pg核酸或3-30個細胞，所述輔助核酸片段為經T→U變換的λDNA。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：對步驟（e）中富集的所述DNA片段的擴增產物進行建庫，從而獲得所述測序文庫。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(a)中所述DNA片段來自30-100pg核酸，或者來自5-20個細胞的核酸。
5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述輔助核酸片段的長度為200-4000bp。
6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述輔助核酸片段的量為10-500ng。
7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的DNA片段與所述輔助核酸片段的質量比為1:20-1:10000。
8.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗體的含量為1-20 ug。
9.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗體與第二混合物的重量比為10-300:1至2-50:1。
10.一種輔助核酸片段的用途，其特征在于，用于制備構建微量核酸樣品文庫的試劑，所述微量核酸樣品為20-200 pg，所述輔助核酸片段為經T→U變換的λDNA。
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