[發明專利]一種細菌耐氯性的評估方法

有效

• 申請號: 201811024489.0
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN109182169B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 賈瑞寶;孫韶華;褚福敏;逯南南;王明泉
• 申請（專利權）人: 山東省城市供排水水質監測中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12Q1/06
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 馬祥明

本發明公開了一種細菌耐氯性的評估方法，包括采用貧營養馴化技術對菌株進行處理，然后對馴養后的菌液計數、稀釋、消毒，通過測定不同作用時間點的消毒劑余量以及細菌存活數量，通過消毒公式計算細菌滅活率為99％的CT值，并與參照菌株大腸埃希氏菌CT值大小比較，實現對試驗菌株的耐氯性評價。本發明包含菌株的復蘇、馴養、菌液的制備以及消毒實驗參數的設計和標準的實驗流程，量化了實際水體中細菌的耐氯能力，為飲用水的微生物安全評估以及耐氯微生物風險控制提供更準確的理論依據，為水廠消毒工藝的改進提供支撐，從而更好的保證飲用水的生物安全性。

技術領域

本發明涉及一種細菌耐氯性的評估方法，尤其是針對水系統中分離的耐氯菌。

背景技術

消毒劑的使用已有相當長的歷史，正如細菌對抗生素的耐藥性一樣，長時間接觸同一種(類)消毒劑的細菌會對該類消毒劑產生抵抗力，即產生抗性。隨著人類社會的發展以及人們健康意識的不斷增強，消毒用品的使用越來越廣泛，細菌對消毒劑的抗性問題也就越加嚴重，這已引起人們的廣泛關注與重視。目前人們對消毒劑抗性還沒有一個統一的定義，其中最能被人們接受的是Russell等就細菌對消毒劑的抗性判斷標準所作的描述，即細菌消毒劑抗性是指對消毒劑的常用濃度不再敏感的菌株的出現，也指那些在能殺滅或抑制大部分該種細菌的消毒劑濃度下，不能被殺滅或抑制的菌株的出現，這種現象稱為細菌對消毒劑有一定的耐受性，即消毒劑抗性。細菌對消毒劑抗性的產生不僅會使消毒劑的消毒效果削減甚至失效，從而使國民經濟蒙受巨大損失,而且還會嚴重影響人類健康。

由于氯的消毒效率高、穩定性好、易于使用、成本低廉等優勢，氯仍然是全世界使用最廣泛的消毒劑。某些細菌可以在含有一定余氯濃度的凈水廠、供水管網中存活，這些對氯具有耐受性的細菌就可以稱作“耐氯菌”(chlorine-resistant bacteria)。Langsrud等人對耐氯菌作了一個相對更理論化的定義，如果某個(或某種)微生物能夠比其他微生物在更高的氯消毒劑中存活或生長，這就說明該微生物具有更高的耐氯性，可以稱為耐氯菌。然而，因為消毒效率跟測試的條件、方法密切相關，因此，在科學的范疇上，耐氯菌的耐受性只是一個相對的概念，并不是一個準確的術語。

由于細菌生存環境以及自身生理結構的差異性，都可能影響其耐氯性，針對供水管網中普遍存在的耐氯菌問題，有必要分析測定不同細菌的滅活特性，進而實現對細菌耐氯性的評估，為供水水廠消毒技術的優選及耐氯菌的控制提供理論支撐及可行性建議。

發明內容

在進行水中分離到的耐氯菌耐氯性研究的過程中發現，細菌經過多次傳代培養后其耐氯性出現退化的現象，實驗的可重復性較差，細菌的耐氯性量化評估困難等問題。

本發明的目的在于提供一種細菌耐氯性的評估方法，為供水水廠消毒技術的優選及耐氯菌的控制提供理論支撐及可行性建議。

本發明是通過以下措施實現的：本發明先對細菌進行貧營養馴化，再對馴化后的樣品進行異養菌計數(HPC)，制備適宜菌濃度的污染樣品，然后進行設計好的消毒實驗程序，最終計算細菌被99％滅活的CT值，通過與參照菌株的CT值比較，實現對細菌耐氯性的評估。其具體技術方案如下：

一種細菌耐氯性的評估方法，包括采用貧營養馴化技術對菌株進行處理，然后對馴養后的菌液計數、稀釋、消毒，通過測定不同作用時間點的消毒劑余量以及細菌存活數量，通過消毒公式計算細菌滅活率為99％的CT值，并與參照菌株大腸埃希氏菌CT值大小比較，實現對試驗菌株的耐氯性評價。具體實施步驟如下：

(1)馴養：將凍存管中保存的菌液加入5mL營養肉湯中，37℃震蕩培養24h，對凍存的菌株進行復蘇。取1mL復蘇后的菌液加入500mL滅菌的管網水中，管網水pH 7.2～7.4，置于22℃培養箱中培養7d；