[發(fā)明專利]一種細(xì)菌耐氯性的評(píng)估方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811024489.0
• 申請(qǐng)日: 2018-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN109182169B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈瑞寶;孫韶華;褚福敏;逯南南;王明泉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省城市供排水水質(zhì)監(jiān)測(cè)中心
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/36;C12Q1/06
• 代理公司: 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 馬祥明

1.一種細(xì)菌耐氯性的評(píng)估方法，其特征在于，采用菌株貧營(yíng)養(yǎng)馴養(yǎng)處理——靜態(tài)消毒實(shí)驗(yàn)——滅活特性分析方法測(cè)定細(xì)菌滅活率為99％的CT值，其方法步驟如下：

(1)馴養(yǎng)：將凍存管中保存的菌液加入營(yíng)養(yǎng)肉湯中，震蕩培養(yǎng)，對(duì)凍存的菌株進(jìn)行復(fù)蘇；取1mL復(fù)蘇后的菌液加入500mL滅菌的管網(wǎng)水中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

(2)菌濃度計(jì)數(shù)：將馴養(yǎng)后的菌液進(jìn)行梯度稀釋，選10³、10⁴、10⁵稀釋倍數(shù)采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂傾注平板法對(duì)樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，37℃培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)平板上菌落數(shù)，乘以對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為馴養(yǎng)后的菌液濃度；

(3)靜態(tài)消毒實(shí)驗(yàn)：根據(jù)步驟(2)中計(jì)數(shù)的菌液濃度，用管網(wǎng)水對(duì)其進(jìn)行稀釋，制備成菌濃度為10⁵CFU/mL～10⁷CFU/mL的樣品，加入消毒劑進(jìn)行消毒實(shí)驗(yàn)；分別計(jì)數(shù)消毒劑加入0min、5min、10min、20min、30min、60min、120min、240min后的細(xì)菌存活數(shù)量及消毒劑余量；

(4)CT值計(jì)算：采用線性回歸方法計(jì)算細(xì)菌滅活率為99％CT值，計(jì)算公式為：

式中：N—反應(yīng)時(shí)間為t時(shí)的細(xì)菌存活量，CFU/mL；

N₀—滅菌之前的細(xì)菌濃度，CFU/mL；

k—反應(yīng)速率常數(shù)；

t—反應(yīng)時(shí)間，min；

c—消毒劑濃度，mg/L；

CT值以消毒劑濃度和反應(yīng)時(shí)間的乘積表示，CT值表示消毒劑的消毒效果，CT值越小，消毒劑的消毒效果越好；

(5)耐氯性評(píng)價(jià)：以大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株作為參照菌株，若待評(píng)價(jià)菌株滅活率為99％CT值小于大腸埃希氏菌菌株滅活率為99％CT值，評(píng)價(jià)為無耐氯性；若待評(píng)價(jià)菌株滅活率為99％CT值大于大腸埃希氏菌菌株滅活率為99％CT值，依據(jù)滅活率為99％CT值得大小評(píng)價(jià)其耐氯性強(qiáng)弱，滅活率為99％CT值越大，其耐氯性越強(qiáng)；

步驟(1)中所述凍存菌株復(fù)蘇條件為加入5mL營(yíng)養(yǎng)肉湯，37℃震蕩培養(yǎng)24h；菌液采用管網(wǎng)水馴養(yǎng)，22℃培養(yǎng)7d；

所述管網(wǎng)水的pH值為7.2～7.4；

步驟(3)所述消毒劑的投加濃度為2.5mg/L余氯濃度；

步驟(5)耐氯性評(píng)價(jià)中所述的參照菌株為大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC8739，菌株來源為中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。