[發(fā)明專(zhuān)利]利用微流控細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)人免疫細(xì)胞抗腫瘤能力的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811023946.4
• 申請(qǐng)日: 2018-09-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109295155A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉安軍;張宏亮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 慶云堂生物科技（北京）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/02
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/02;C12N5/09
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 陳娟

本發(fā)明涉及一種利用微流控細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)人免疫細(xì)胞抗腫瘤能力的方法，首先培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，再將人體新分離出的白細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合，通過(guò)微流控細(xì)胞芯片提供細(xì)胞生存所需要的培養(yǎng)條件，而后置于光學(xué)顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的相互作用，得出人體免疫細(xì)胞的抗腫瘤能力。本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有的腫瘤相關(guān)檢測(cè)手段中缺少對(duì)人體白細(xì)胞抗腫瘤能力的檢測(cè)等不足，高效綜合利用了現(xiàn)代先進(jìn)的仿人體環(huán)境技術(shù)及實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)，可在腫瘤的預(yù)防和治療過(guò)程中起到重要的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于，涉及微流控技術(shù)，尤其是一種利用“微流控-人體環(huán)境”模擬技術(shù)檢測(cè)人體免疫細(xì)胞抗腫瘤能力的方法。

背景技術(shù)

癌癥是目前影響人類(lèi)健康的惡性腫瘤，其治愈困難且致死率高，且其發(fā)展早期基本不會(huì)被發(fā)現(xiàn)，因此對(duì)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)及免疫細(xì)胞的抗腫瘤能力的檢測(cè)至關(guān)重要。腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，患者體內(nèi)產(chǎn)生的反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類(lèi)物質(zhì)，目前腫瘤標(biāo)志物水平的檢測(cè)對(duì)腫瘤輔助診斷及判斷腫瘤預(yù)后、轉(zhuǎn)歸、評(píng)價(jià)療效也都表現(xiàn)出了重要的意義，而關(guān)于人體白細(xì)胞只能檢測(cè)其各個(gè)亞群的數(shù)量，卻不能得出其活性的強(qiáng)弱。因而這些檢測(cè)手段并不能體現(xiàn)機(jī)體免疫細(xì)胞的抗腫瘤活性，不能對(duì)腫瘤的預(yù)防起到積極的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種利用“微流控-人體環(huán)境”模擬技術(shù)檢測(cè)人體免疫細(xì)胞抗腫瘤能力的方法，該檢測(cè)方法可有效檢測(cè)出人體免疫細(xì)胞對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的作用。

本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

一種利用微流控細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)人免疫細(xì)胞抗腫瘤能力的方法，首先培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，再將人體新分離出的白細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合，通過(guò)微流控細(xì)胞芯片提供細(xì)胞生存所需要的培養(yǎng)條件，而后置于光學(xué)顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的相互作用，得出人體免疫細(xì)胞的抗腫瘤能力。

而且，所述的腫瘤細(xì)胞包括人乳腺癌細(xì)胞、人肺癌細(xì)胞、人結(jié)直腸癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人甲狀腺癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人食管癌細(xì)胞、人白血病細(xì)胞。

而且，所述的培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的方法是將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的腫瘤細(xì)胞放入腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中，置于36～38℃、5％CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中過(guò)夜。

而且，所述的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基為RPMI-1640完全培養(yǎng)基或DMEM培養(yǎng)基或MEM培養(yǎng)基或F12培養(yǎng)基。

而且，所述的白細(xì)胞的分離方法是取新鮮的血液，利用紅細(xì)胞裂解液除去紅細(xì)胞，生理鹽水洗滌，最后用白細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，使細(xì)胞密度為1×10⁶～3×10⁶個(gè)/mL，得到白細(xì)胞懸液。

而且，所述的白細(xì)胞培養(yǎng)基與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基相同。

具體步驟如下：

(1)生長(zhǎng)狀態(tài)良好的腫瘤細(xì)胞導(dǎo)入培養(yǎng)板的細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域中，然后添加培養(yǎng)基到相應(yīng)的孔中，將此培養(yǎng)板置于37℃、5％CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中過(guò)夜；

(2)取新鮮的血液，利用紅細(xì)胞裂解液除去紅細(xì)胞，生理鹽水洗滌，最后用培養(yǎng)基重懸，得到白細(xì)胞懸液；

(3)將白細(xì)胞導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中，使白細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞混合均勻，然后將培養(yǎng)板連到微流控細(xì)胞芯片主機(jī)上，由該機(jī)器提供細(xì)胞事宜的培養(yǎng)環(huán)境；

(4)對(duì)培養(yǎng)板中的細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行連續(xù)拍照，觀察不同時(shí)間白細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)。

(5)根據(jù)白細(xì)胞攻擊腫瘤細(xì)胞的速度和數(shù)量，得出相應(yīng)的人白細(xì)胞抗腫瘤能力的強(qiáng)弱。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：