[發明專利]利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法

在審

• 申請號: 201811023946.4
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN109295155A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 劉安軍;張宏亮
• 申請（專利權）人: 慶云堂生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/09
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 陳娟

1.一種利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：首先培養腫瘤細胞，再將人體新分離出的白細胞與腫瘤細胞混合，通過微流控細胞芯片提供細胞生存所需要的培養條件，而后置于光學顯微鏡下觀察兩種細胞的相互作用，得出人體免疫細胞的抗腫瘤能力。

2.根據權利要求1所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：所述的腫瘤細胞包括人乳腺癌細胞、人肺癌細胞、人結直腸癌細胞、人胃癌細胞、人甲狀腺癌細胞、人肝癌細胞、人食管癌細胞、人白血病細胞。

3.根據權利要求1所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：所述的培養腫瘤細胞的方法是將生長狀態良好的腫瘤細胞放入腫瘤細胞培養基中，置于36～38℃、5％CO₂的恒溫培養箱中過夜。

4.根據權利要求3所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：所述的腫瘤細胞培養基為RPMI-1640完全培養基或DMEM培養基或MEM培養基或F12培養基。

5.根據權利要求1所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：所述的白細胞的分離方法是取新鮮的血液，利用紅細胞裂解液除去紅細胞，生理鹽水洗滌，最后用白細胞培養基重懸，使細胞密度為1×10⁶～3×10⁶個/mL，得到白細胞懸液。

6.根據權利要求5所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：所述的白細胞培養基與腫瘤細胞培養基相同。

7.根據權利要求1所述的利用微流控細胞培養檢測人免疫細胞抗腫瘤能力的方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)生長狀態良好的腫瘤細胞導入培養板的細胞培養區域中，然后添加培養基到相應的孔中，將此培養板置于37℃、5％CO₂的恒溫培養箱中過夜；

(2)取新鮮的血液，利用紅細胞裂解液除去紅細胞，生理鹽水洗滌，最后用培養基重懸，得到白細胞懸液；

(3)將白細胞導入腫瘤細胞培養基中，使白細胞和腫瘤細胞混合均勻，然后將培養板連到微流控細胞芯片主機上，由該機器提供細胞事宜的培養環境；

(4)對培養板中的細胞培養區域在倒置熒光顯微鏡下進行連續拍照，觀察不同時間白細胞和腫瘤細胞的狀態。

(5)根據白細胞攻擊腫瘤細胞的速度和數量，得出相應的人白細胞抗腫瘤能力的強弱。