[發(fā)明專利]一種ADAR1過(guò)表達(dá)病毒載體、其構(gòu)建方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811023833.4
• 申請(qǐng)日: 2018-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN109182377A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李俊杰;劉善收;謝建剛;趙彬;尹文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/861
• 分類號(hào): C12N15/861;C12N15/66;C12N5/10;A61K38/50;A61P29/00;A61P31/00
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 劉振

本發(fā)明提供了一種RNA的腺苷脫氨酶1過(guò)表達(dá)病毒載體、制備方法及在所述的RNA的腺苷脫氨酶1過(guò)表達(dá)病毒載體具有保護(hù)小腸結(jié)構(gòu)完整、維持腸道穩(wěn)態(tài)；提高腸道巨噬細(xì)胞的活性；抑制炎性細(xì)胞因子的水平及在制備治療膿毒癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的RNA的腺苷脫氨酶1過(guò)表達(dá)病毒載體為膿毒癥的治療提供了新的潛在的治療靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種ADAR1過(guò)表達(dá)病毒載體，尤其是一種ADAR1過(guò)表達(dá)病毒載體、其構(gòu)建方法及在保護(hù)小腸結(jié)構(gòu)完整、維持腸道穩(wěn)態(tài)；提高腸道巨噬細(xì)胞的活性；抑制炎性細(xì)胞因子的水平及制備治療膿毒癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

膿毒癥(sepsis)是由感染所引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征，是嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷及感染性疾病的常見并發(fā)癥。當(dāng)膿毒癥繼續(xù)發(fā)展合并循環(huán)功能衰竭時(shí)，病情進(jìn)展為感染性休克和多器官功能障礙綜合征。膿毒癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且病死率高，是戰(zhàn)時(shí)創(chuàng)傷和急危重癥醫(yī)學(xué)面臨的突出難題。

巨噬細(xì)胞是一種多功能的免疫細(xì)胞，主要參與機(jī)體固有免疫，同時(shí)也是聯(lián)系固有免疫和特異免疫的橋梁，其生物學(xué)活性主要包括：吞噬清除病菌和壞死細(xì)胞、抗原呈遞和分泌炎癥介質(zhì)。

腸道既是膿毒癥病程發(fā)展過(guò)程極易損傷的器官，也是膿毒癥病情惡化的始動(dòng)器官，腸道細(xì)胞受損導(dǎo)致的腸道屏障功能障礙在膿毒癥連續(xù)發(fā)生發(fā)展中具有至關(guān)重要的作用。

文獻(xiàn)Anti-cytokine therapies in response to systemic infection(J.Investigat.Dermatol.Sympos.Proc.6(2001)244–250)、文獻(xiàn)Anti-cytokine and anti-inflammatory therapies for the treatment of severe sepsis:progress andpitfalls(Proc.Nutr.Soc.63(2004)437–441)和文獻(xiàn)MiR-212-3p inhibits LPS-inducedinflammatory response through targeting HMGB1in murine macrophages(Exp.CellRes.350(2017)318–326)公開了膿毒癥時(shí)腸道巨噬細(xì)胞分泌大量炎性因子，造成腸道穩(wěn)態(tài)失衡，誘發(fā)了全身性損傷。巨噬細(xì)胞的過(guò)度活化是腸道穩(wěn)態(tài)失衡的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞，巨噬細(xì)胞的損傷與激活是機(jī)體發(fā)生失控性炎癥反應(yīng)的根本原因。

RNA的腺苷脫氨酶1(ADAR1)是RNA編輯酶家族成員之一，其通過(guò)脫氨作用催化雙鏈RNA上腺嘌呤核苷變?yōu)榇吸S嘌呤核苷，即A-I轉(zhuǎn)換，使遺傳密碼發(fā)生改變，所編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能隨之發(fā)生變化。RNA的腺苷脫氨酶1是一種特異性的修飾酶，將特殊位點(diǎn)上的腺苷(A)去氨基轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤(I)，核糖體解碼時(shí)讀作鳥嘌呤(G)，導(dǎo)致雙鏈RNA核苷酸替換、相應(yīng)蛋白氨基酸改變、RNA結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、50mRNA降解、依賴RNA復(fù)制的病毒遺傳不穩(wěn)定性等。ADAR1廣泛存在于各種組織中，參與多種重要生理過(guò)程，包括胚胎發(fā)育、造血系統(tǒng)發(fā)育、中樞神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)傳遞以及機(jī)體免疫等。許多研究發(fā)現(xiàn)RNA編輯酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要功能，例如文獻(xiàn)ADAR1prevents liver injury from inflammation andsuppresses interferon production in hepatocytes(Am.J.Pathol.185(2015)3224–3237)公開了RNA編輯導(dǎo)致參與該過(guò)程信號(hào)通路中蛋白的改變。