[發(fā)明專利]一種半滑舌鰨外泌體性別差異表達(dá)標(biāo)簽及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811019139.5
• 申請日: 2018-09-03
• 公開（公告）號: CN109055520B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張博;賈磊;趙娜;李仰真;劉克奉;高磊;高燕
• 申請（專利權(quán)）人: 天津渤海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.半滑舌鰨精漿外泌體microRNA在性別鑒定中的應(yīng)用，其特征在于所述microRNA性別標(biāo)簽為dre-miR-10d-5p，其序列為TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG。

2.權(quán)利要求1所述microRNA性別標(biāo)簽的篩選方法，如下：

1）精漿外泌體分離鑒定后，對精漿外泌體smallRNA進(jìn)行測序分析，將 clean reads 依次和 Rfam 數(shù)據(jù)庫、cDNA 序列、物種重復(fù)序列庫、miRBase 數(shù)據(jù)庫對測序結(jié)果中的smallRNA 進(jìn)行分類注釋；將分類注釋后的序列和 miRBase 數(shù)據(jù)庫比對，進(jìn)行已知microRNA 的統(tǒng)計(jì)；使用未注釋上的序列進(jìn)行新的 microRNA 預(yù)測，microRNA差異表達(dá)分析，差異表達(dá)miRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析，最后與樣品進(jìn)行相關(guān)性匹配，篩選出一種或者多種，對兩種樣品具有指示作用的microRNA作為候選microRNAs生物標(biāo)記物；

2）將候選標(biāo)簽microRNAs按照以下四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行過濾：（1）在兩種樣品中表達(dá)有極顯著差異，即p值小于0.01；（2）與已知數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對確認(rèn)存在的microRNAs；（3）兩樣品中至少有一個(gè)的TPM值大于10；（4）foldChange值大于4，所述foldChange值=TPM _{Sample_ZZ.} / TPM_{Sample_ZW}；

3）提取隨機(jī)兩組驗(yàn)證樣本：經(jīng)外周血染色體鑒定后的雄魚及偽雄魚精漿來源外泌體總RNA，利用MicroRNA定量分析試劑盒定量檢測步驟2）過濾后的microRNAs的差異表達(dá)情況，篩選出最具標(biāo)簽指示作用的miRNAs作為最終的標(biāo)簽microRNAs；根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析原理，P值小于0.05為顯著差異，最終篩選到dre-miR-10d-5p，序列為TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG，此種標(biāo)簽在雄魚樣本中有高表達(dá)，而在偽雄魚樣本中表達(dá)量極低。