[發(fā)明專利]一種篩選四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811015131.1
• 申請日: 2018-08-31
• 公開（公告）號: CN109115933B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 譚光國;周倩;孟平;王海波;陳鵬
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54
• 代理公司: 西安創(chuàng)知專利事務所 61213
• 代理人: 譚文琰

本發(fā)明公開了一種篩選四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的方法，包括以下步驟：一、四逆湯抗心肌缺血的內源性代謝物的確定和峰面積的測定；二、四逆湯體內移行成分的確定和峰面積的測定；三、四逆湯抗心肌缺血的內源性代謝物的峰面積與四逆湯體內移行成分的峰面積的相關性分析，篩選出四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎。本發(fā)明基于異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血模型，采用超高效液相色譜?四極桿?飛行時間質譜的非靶向代謝組學技術和基于超高效液相色譜?三重四極桿質譜靶向代謝組學技術，篩選出12種四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎，提高了四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的準確性，縮短了篩選周期，減少了篩選耗費成本。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種篩選四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的方法。

背景技術

四逆湯由附子、干姜、甘草組成，是張仲景所著《傷寒論》中的經(jīng)典名方，具有回陽救逆的功效，現(xiàn)代常用于心肌缺血、心肌梗死和心力衰竭等心血管疾病。四逆湯因藥力峻猛、療效卓著一直受到歷代醫(yī)家的重視，研究發(fā)現(xiàn)附子中的烏頭類生物堿、干姜中的姜辣素類化合物和總揮發(fā)油、甘草中的黃酮和皂苷類化合物是四逆湯中的主要化學成分。然而，四逆湯發(fā)揮心血管活性的真正藥效成分是哪些？這些藥效成分與生物活性之間的相互作用關系如何？這些是進一步研發(fā)安全有效、質量可控的四逆湯現(xiàn)代中藥的基礎。

中藥具有多成分、多途經(jīng)、多靶點特點，其發(fā)揮作用是“系統(tǒng)(藥物系統(tǒng))-系統(tǒng)(生物系統(tǒng))”的作用模式。挖掘中藥藥效成分是揭示中藥科學內涵、指導臨床合理用藥的前提。生物效應導向的系統(tǒng)分離結合藥效實驗仍然是中藥藥效物質基礎研究最常用的方法。但這種方法周期長、通量低，并且分解和忽視了中藥“多組分-多靶點”整體作用的本質。而中藥多組分“譜-效”研究大多局限于“多成分譜”與中藥“單一效應”指標之間的“系統(tǒng)-點”的研究，仍然不能夠反映中藥通過多個成分與多個靶標共同作用的特征。另外，由于中藥效應的多樣性，導致藥效指標選擇的科學性與合理性也存在問題。因此有必要建立與中藥“系統(tǒng)-系統(tǒng)”特點相適應的活性成分群研究新方法，為中藥藥效物質基礎研究提供支撐。

代謝組學作為系統(tǒng)生物學中的一門新興“組學”，其核心思想是研究外源性物質對生物體代謝網(wǎng)絡調控的整體效應，并以生物體內代謝小分子作為對象，研究藥物對機體代謝組的系統(tǒng)作用。由于代謝組學是生物體所有基因、蛋白功能活動的終點，因而代謝組被視為生物體整體功能狀態(tài)的“生化表型”，代謝組學發(fā)現(xiàn)的小分子標志物群能夠即時、靈敏、真實地反映疾病或藥物作用下生物體代謝網(wǎng)絡的應答與調節(jié)，已成為藥物治療的潛在靶點，可作為藥效評價的替代指標。中藥血清藥物化學以從口服方劑后的含藥血清中分離鑒定中藥藥效物質基礎的思路和研究設計，使研究結果體現(xiàn)中藥成分的體內治療狀態(tài)，獲得體現(xiàn)方劑治療效應的體內直接作用物質，其理念及方法符合中藥整體作用模式。中藥血清藥物化學研究方法為發(fā)現(xiàn)中藥藥效物質基礎提供了方法學支撐。中藥入血成分與中藥藥效之間必然存在關聯(lián)性，可以利用相關分析將入血成分譜的峰面積(含量)與藥效作用強度的動態(tài)變化聯(lián)系起來，通過統(tǒng)計分析并通過生物學實驗來確定眾多成分中真正的有效成分。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題在于針對上述現(xiàn)有技術的不足，提供了一種篩選四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的方法。該方法基于異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血模型，采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質譜(UHPLC/Q-TOFMS)的非靶向代謝組學技術和基于超高效液相色譜-三重四極桿質譜(UHPL/QQQ-MS)靶向代謝組學技術，篩選出12種四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎，提高了四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的準確性，縮短了篩選周期，減少了篩選耗費成本。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案是：一種篩選四逆湯抗心肌缺血藥效物質基礎的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟一、四逆湯抗心肌缺血的內源性代謝物的確定和峰面積的測定

步驟101、確定四逆湯抗心肌缺血的內源性代謝物：