[發明專利]一種亞硝基胍誘變米曲霉漆酶降解葵花粕中木質素的方法

在審

• 申請號: 201811012024.3
• 申請日: 2018-08-31
• 公開（公告）號: CN109234266A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 徐雙貴;胡培;李壘
• 申請（專利權）人: 安徽省新康飼料有限公司
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N9/02;C12R1/69
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了一種亞硝基胍誘變米曲霉漆酶降解葵花粕中木質素的方法，涉及生物降解領域。本發明包括如下步驟：S01：在培養皿中通過亞硝基胍對米曲霉高產漆酶進行誘變；S02：選取突變型的菌株轉接至PDA板培養；S03：將液體菌種以體積比20％?50％接種到漆酶產酶培養基；S04：對粗米曲霉高產漆酶進行提純；S05：葵花粕洗凈烘干后粉碎成粒；S06：在無菌罐內加入葵花粕粒和培養營養液，攪拌至固液混合均勻并顯平坦狀；S07：在無菌罐中接種米曲霉高產漆酶；S08：木質素降解完成。本發明通過亞硝基胍誘變米曲霉高產漆酶，對得到粗漆酶進行提純，利用在無菌罐中漆酶與葵花粕的發酵快速降解木質素，提高了木質素的降解轉化效率，降解效果穩定。

技術領域

本發明屬于生物降解領域，特別是涉及一種亞硝基胍誘變米曲霉漆酶降解葵花粕中木質素的方法。

背景技術

亞硝基胍(NTG)，用于誘變育種，是一種公認效果顯著的化學超誘變劑；亞硝基胍屬烷化劑，而烷化劑是突變中一類相當有效的化學誘變劑，這類誘變劑具有1個或多個活性烷基，它們易取代DNA分子中活潑的氫原子，使DNA分子上的堿基及磷酸部分被烷化，DNA復制時導致堿基配對錯誤而引起突變。

米曲霉高產漆酶主要降解木質素中的酚型結構，米曲霉高產漆酶在介體存在時對非酚型結構也具有降解作用。米曲霉高產漆酶的復合作用不僅有利于木質素大分子中多樣化的木質素結構基團的同步降解，而且有利于抑制木質素降解產物的再聚合。當前，已有少數工藝利用幾種木質素酶復合降解木質素。但這些工藝通常利用粗酶液進行木質素的降解，如河南天冠企業集團有限公司利用白腐菌粗漆酶和粗過氧化物酶協同降解秸稈木質素促進燃料乙醇的轉化效率。但由于米曲霉高產漆酶中成分非常復雜，很難確定木質素降解是木質素酶還是其它成分的作用，且每批次酶液的成分都不可能保持一致，因此可能導致處理效果不穩定。

發明內容

本發明的目的在于提供一種亞硝基胍誘變米曲霉漆酶降解葵花粕中木質素的方法，通過亞硝基胍誘變米曲霉高產漆酶，對得到粗漆酶進行提純，利用在無菌罐中漆酶與葵花粕的發酵快速降解木質素，解決了現有的米曲霉高產漆酶成分不能保持一致、轉化效率低的問題。

為解決上述技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明為一種亞硝基胍誘變米曲霉漆酶降解葵花粕中木質素的方法，包括如下步驟：

步驟S01：在培養皿中通過亞硝基胍對米曲霉高產漆酶進行誘變；

步驟S02：選取突變型的菌株轉接至PDA板培養，得到液體菌種；

步驟S03：將液體菌種以體積比20％-50％接種到漆酶產酶培養基，獲取粗米曲霉高產漆酶；

步驟S04：對粗米曲霉高產漆酶進行提純，得到米曲霉高產漆酶；

步驟S05：葵花粕洗凈烘干后粉碎成粒；

步驟S06：在無菌罐內加入葵花粕粒和培養營養液，攪拌至固液混合均勻并顯平坦狀；

步驟S07：在無菌罐中接種米曲霉高產漆酶；

步驟S08：培養結束后，105℃下烘干至恒重，木質素降解完成。

優選地，所述步驟S01中，米曲霉高產漆酶的具體的誘變方法如下：

步驟Y01：在培養皿中的完全固定培養基表面涂布待處理的米曲霉高產漆酶懸液；

步驟Y02：在培養皿中央加上亞硝基胍晶體；

步驟Y03：通過接種環緊靠亞硝基胍制菌圈外側；

步驟Y04：將菌苔挑置與無菌生理鹽水中制成菌懸液；

步驟Y05：對菌懸液的突變型進行選擇。