[發明專利]付之鱟試驗的抗凝血酶III用的前處理劑及前處理方法

有效

• 申請號: 201811010343.0
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN109085357B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 相澤真紀;小田俊男;明田川純
• 申請（專利權）人: 生化學工業株式會社
• 主分類號: G01N33/579
• 分類號: G01N33/579;C07K14/81;C07K5/103
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本申請涉及付之鱟試驗的抗凝血酶III用的前處理劑及前處理方法。具體來說，其提供一種手段，其可減少將抗凝血酶III付之鱟試驗時的反應干擾作用，因此可高精度地實施抗凝血酶III的鱟試驗。在與二價金屬鹽共存的狀態下，將付之鱟試驗的抗凝血酶III供至使蛋白質失活的處理中，由此降低將抗凝血酶III付之鱟試驗時的反應干擾作用。

本申請是申請日為2013年12月27日，申請號為201380068652.2，發明名稱為“付之鱟試驗的抗凝血酶III用的前處理劑及前處理方法”的申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及付之使用了鱟試劑的內毒素等靶標物質的檢測試驗的抗凝血酶III用的前處理劑和包含該處理劑的鱟試劑盒、以及使用了它們的抗凝血酶III的前處理方法和使用了鱟試劑的內毒素等靶標物質的測定方法。

本發明中，有時使用下述簡稱。

Et：內毒素

BG：(1→3)-β-D-葡聚糖

ATIII：抗凝血酶III

背景技術

內毒素是存在于革蘭氏陰性細菌的細胞壁外膜上的脂多糖，且己知是強致熱原。此外，己知的是，除了發熱以外，內毒素還會引起休克癥狀等各種病狀。因此，從確保醫藥品等的安全性的觀點出發，注射劑等醫藥品、水、醫療器具等中的內毒素的檢測、定量很重要。

己知的是，若革蘭氏陰性細菌感染鱟，則會引起血液凝固，該現象被用于內毒素的檢測。即，可以使用鱟血細胞提取液(鱟的變形細胞溶解物，下文中也稱為“LAL”)測定內毒素。這被稱為鱟試驗，利用存在于LAL中的各種蛋白質(均為絲氨酸蛋白酶)的級聯反應，該反應是通過內毒素與LAL接觸而發生的。

ATIII為血液中的抗凝血因子，被用于彌散性血管內凝血(DIC)等的治療。此處，由于ATIII為絲氨酸蛋白酶抑制劑，因此可抑制參與存在于LAL中的級聯反應的蛋白質的活性(非專利文獻1)。這樣，有時通過待測試樣而顯示出對于鱟試劑的抑制作用。這種抑制作用有時可通過待測試樣的稀釋來避免(非專利文獻2)。但是，ATIII對于鱟試劑的抑制作用極強，為了將ATIII制劑(注射劑)付之鱟試驗，需要稀釋64倍以上(非專利文獻2)。由此，若考慮鱟試劑的檢測靈敏度(校準曲線的最小內毒素濃度)，則認為難以將鱟試驗適用于ATIII制劑(非專利文獻2)。實際上，關于包含ATIII的試樣，現在也利用兔發熱試驗進行內毒素的檢測(非專利文獻1)。

非專利文獻1中公開了一種測定ATIII制劑的Et的方法，其特征在于，將ATIII制劑稀釋100倍，在70℃加熱20分鐘進行前處理后，與LAL反應，通過光散射法進行測定。該方法的技術特征在于，為了使Et的檢測高靈敏度化，代替使用分光光度計的比濁法而采用了使用光散射測定裝置的光散射法。但是，該方法與上述同樣地必須進行高倍率的稀釋，而且至少還存在以下的問題。

(1)作為鱟試驗的測定裝置而廣泛普及的是分光光度計，為了實施光散射法而需要另行新導入、使用光散射測定裝置。

(2)在日本藥典中，作為Et的光學定量法僅規定了比濁法和比色法，未規定光散射法。

另外，在專利文獻1中記載了下述生物體來源的試樣的Et及BG的測定方法，其特征在于，使生物體來源的試樣與堿土金屬硫酸鹽或堿土金屬鹵化物接觸，加熱進行前處理后，付之使用鱟試劑的測定。

另外，在專利文獻2中記載了下述血液來源的試樣的Et及BG的測定方法，其特征在于，將生物體來源的試樣與海地美銨(hexadimethrine)化合物、堿金屬氫氧化物、非離子性表面活性劑及堿土金屬鹵化物混合，加熱進行前處理后，付之使用鱟試劑的測定。

另外，在專利文獻3中記載了下述有可能含有ATIII的試樣的Et測定方法，其特征在于，使生物體來源的試樣與固定有脂多糖和/或脂質A結合肽的載體接觸，吸附回收Et后，付之使用鱟試劑等的測定。