[發明專利]用于控制小麥葉片衰老的引物、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811004775.0
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN108913808B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 張增林;郭永峰;李偉;高曉明;徐萌萌
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 李祺;張潔

本發明公開了一種用于控制小麥葉片衰老的引物、試劑盒及其應用，屬于植物基因工程和小麥分子育種技術領域，能夠解決在延緩許多作物衰老突變體中，作物農藝性狀較差，很難被利用的問題。該技術方案包括根據小麥基因TaNACS設計特異性上下游引物，利用過量表達TaNACS基因促進小麥葉片的衰老，利用RNAi技術使TaNACS基因在小麥中沉默而延緩小麥葉片的衰老。本發明應用小麥TaNACS基因可以控制小麥葉片衰老過程，同時該基因的過表達或者基因沉默材料均不影響小麥其它農藝性狀。

技術領域

本發明屬于植物基因工程和小麥分子育種技術領域，尤其涉及一種用于控制小麥葉片衰老的引物、試劑盒及其應用。

背景技術

衰老是植物發育的最后一個階段，其不僅受溫度、病害、脅迫等外因影響，同時還被基因調控，受體內激素水平的影響。葉片衰老與作物產量及品質息息相關，作物早衰或晚衰不利于完成其正常的生命周期，造成作物減產或者品質降低，嚴重影響農藝性狀。因此，葉片衰老調控因子的發現及其應用是實現作物高產高品質的有效途徑之一。

小麥是世界上重要的糧食作物之一，提高小麥產量是諸多育種家的目標。葉片早衰會縮短有效光合作用時間，使小麥減產；適時晚衰則可以有效提高小麥產量；但過度晚衰又會使小麥生育周期延長，不利于農業生產耕作。因此，小麥的衰老時間的調控是產量與品質提高的重要控制因素。雖然，在許多作物中均有延緩衰老突變體被研究，但多數農藝性狀較差，很難被利用。因此，獲得特異調控小麥衰老但不影響其它農藝性狀的基因是解決延緩衰老提高小麥產量的關鍵策略之一。

發明內容

針對現有技術存在的不足之處，本發明提出用于控制小麥葉片衰老的的引物、試劑盒及其應用，其能夠特異調控小麥衰老，同時不影響其它農藝性。

為解決所述技術問題，本發明采用的技術方案為：

根據小麥基因TaNACS設計特異性上下游引物，具體包括：

本發明還提出一種試劑盒，包含如上述技術方案所述的用于控制小麥葉片衰老的引物。

本發明還提出一種利用上述技術方案所述的引物控制小麥葉片衰老的方法，具體的，利用過量表達TaNACS基因促進小麥葉片的衰老，利用RNAi技術使TaNACS基因在小麥中沉默而延緩小麥葉片的衰老。

作為優選，所述利用過量表達TaNACS基因促進小麥葉片的衰老，具體包括：

將以小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴增得到的TaNACS基因產物通過重組連接到過表達載體上，形成TaNACS重組載體；

將所述TaNACS重組載體整合進入小麥基因組，篩選獲得陽性轉基因材料。

作為優選，所述利用RNAi技術使TaNACS基因在小麥中沉默而延緩小麥葉片的衰老，具體包括：

將利用巢式PCR得到的RNAi片段連接到載體上，得到TaNACS基因RNAi最終載體；

將所述RNAi最終載體整合進入小麥基因組，篩選獲得陽性轉基因材料。

作為優選，所述利用巢式PCR得到RNAi片段，具體包括：

以TaNACS cDAN序列為模板，以SEQ ID NO.3為上游引物、SEQ ID NO.4為下游引物進行PCR擴增，獲得初步的RNAi片段；

將上述初步的RNAi片段稀釋50倍，以稀釋后的初步的RNAi片段為模板，以SEQ IDNO.5為上游引物、SEQ ID NO.6為下游引物進行第二輪PCR擴增，得到RNAi片段。