[發明專利]用于控制小麥葉片衰老的引物、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811004775.0
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN108913808B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 張增林;郭永峰;李偉;高曉明;徐萌萌
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 李祺;張潔

1.用于控制小麥葉片衰老的引物，其特征在于，根據小麥基因TaNACS設計特異性上下游引物，具體包括：

。

2.試劑盒，其特征在于，包含如權利要求1所述的用于控制小麥葉片衰老的引物。

3.利用權利要求1所述的引物控制小麥葉片衰老的方法，其特征在于，包括利用過量表達TaNACS基因促進小麥葉片的衰老，以及利用RNAi技術使TaNACS基因在小麥中沉默而延緩小麥葉片的衰老；

其中，所述利用過量表達TaNACS基因促進小麥葉片的衰老，具體包括：

將以中國春小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴增得到的TaNACS基因產物通過重組連接到過表達載體上，形成TaNACS重組載體；

將所述TaNACS重組載體整合進入小麥基因組，篩選獲得陽性轉基因材料；

所述利用RNAi技術使TaNACS基因在小麥中沉默而延緩小麥葉片的衰老，具體包括：

以TaNACS cDNA序列為模板，以SEQ ID NO.3為上游引物、SEQ ID NO.4為下游引物進行PCR擴增，獲得初步的RNAi片段；

將上述初步的RNAi片段稀釋50倍，以稀釋后的初步的RNAi片段為模板，以SEQ ID NO.5為上游引物、SEQ ID NO.6為下游引物進行第二輪PCR擴增，得到RNAi片段，進而將所述RNAi片段連接到載體上，得到TaNACS基因RNAi最終載體；

將所述RNAi最終載體整合進入小麥基因組，篩選獲得陽性轉基因材料。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括鑒定陽性轉基因材料的步驟，具體為：

以TaNACS重組載體及TaNACS基因RNAi最終載體轉基因材料的cDNA為模板，以SEQ IDNO.7為上游引物、SEQ ID NO.8為下游引物進行熒光定量PCR檢測，鑒定陽性轉基因材料。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述以小麥cDNA為模板，以SEQ ID NO.1為上游引物、SEQ ID NO.2為下游引物特異擴增得到TaNACS基因產物的擴增程序為：

95℃ 3 min；95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 1 min，33個循環；72℃ 10 min。