[發明專利]一種提高玉鈴花組織培養容器苗效率的方法

有效

• 申請號: 201811004404.2
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN109329047B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 張凡;翟恒華;胡愛章;王傳永;馬海菊;周艷威;陳紅;陸小清
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所;青島彩盛農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所(普通合伙) 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種提高玉鈴花組織培養容器苗效率的方法，其特征在于通過以下步驟進行：

1) 用濃硫酸處理玉鈴花種子，清洗后置于種子萌發培養基中培養；其中所述的種子萌發培養基配制方法：以1/2MS培養基為基礎培養基，添加60-80 mg/L的赤霉素，60-80 mg/L的Vc，10－20 g/L的蔗糖，400－600mg/L的活性炭和8－12g/L的瓊脂粉，并調節培養基pH值至5.6－6.0；

2) 截取萌發的幼苗的帶芽莖段作為外植體，在誘導培養基中進行培養；

3) 截取帶愈傷組織的小不定芽，置入新的誘導培養基中繼續繼代培養；

4) 將無根不定芽定植在生根培養基中進行生根培養；

5) 將根長達4-5cm的幼苗移植錐形穴盤中，以蛭石為基質，每2-3天澆一次營養液，18-21天后移植到以泥炭土和珍珠巖為基質的無紡布容器中；

其中，步驟2）和步驟3）中所述的誘導培養基配制方法：以WPM培養基為基礎培養基，添加0.03-0.08mg/L的TDZ，0.3-0.8 mg/L的BA，以及蔗糖和瓊脂粉，調節培養基pH值至5.6－6.0；

步驟4）中所述的生根培養基配制方法：以1/2WPM培養基為基礎培養基，添加0.05-0.1mg/L的IBA，0.03-0.05 mg/L的NAA，1－2mg/L的活性炭和7-8g/L瓊脂粉，調節培養基pH值至5.6－6.0；

步驟5）中所述的營養液配制方法：以Hoagland營養液為基礎，添加0.005－0.02mg/L的殼寡糖；調節營養液pH值至6.8－7.2。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1）的種子萌發培養基中，添加60mg/L的赤霉素，80 mg/L的Vc，15 g/L的蔗糖，500mg/L的活性炭和10g/L的瓊脂粉，并調節培養基pH值至5.8；所述步驟2）和步驟3）的誘導培養基中，添加0.05mg/L的TDZ，0.5 mg/L的BA，以及15 g/L的蔗糖和10g/L的瓊脂粉，調節培養基pH值至5.8；所述步驟4）的生根培養基中，添加0.05mg/L或者0.1mg/L的IBA，0.03 mg/L或者0.05mg/L的NAA，2mg/L的活性炭和7-8g/L瓊脂粉，調節培養基pH值至5.8；所述步驟5）的營養液中，添加0.01 mg/L的殼寡糖并調節營養液pH值至7.0；步驟5）所述基質為泥炭土：珍珠巖=2:1。

3.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟1）是將種子置入濃硫酸中浸泡0.5－1.5h，倒掉濃硫酸后水沖洗，晾干；隨后在超凈臺中，用70%的乙醇浸泡20－40s，升汞中滅菌，無菌水清洗，接種在種子萌發培養基中，每個培養瓶放置3-4粒種子，4℃低溫處理3d后置入組培室中，于下述條件培養：溫度25℃，光暗節律為：光16h/d，暗 8h/d，光照強度4000lux。

4.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟2）中是選擇萌發10-13d的幼苗，截取0.8-1.2cm的帶腋芽的莖段，按植物形態學將下端插入誘導培養基中。

5.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于：調節培養基pH值根據情況采用1mol/L的NaOH或HCl調節至所需pH值。

6.一種用于玉鈴花組織培養的培養基，其特征在于：所述培養基是由種子萌發培養基、誘導培養基和生根培養基組成，其中，種子萌發培養基：以1/2MS培養基為基礎培養基，添加60-80 mg/L的赤霉素，60-80 mg/L的Vc，10－20 g/L的蔗糖，400－600mg/L的活性炭和8－12g/L的瓊脂粉，并調節培養基pH值至5.6－6.0；誘導培養基：以WPM培養基為基礎培養基，添加0.03-0.08mg/L的TDZ，0.3-0.8 mg/L的BA，以及蔗糖和瓊脂粉，調節培養基pH值至5.6－6.0；生根培養基：以1/2WPM培養基為基礎培養基，添加0.05-0.1mg/L的IBA，0.03-0.05 mg/L的NAA，1－2mg/L的活性炭和7-8g/L瓊脂粉，調節培養基pH值至5.6－6.0。

7.按照權利要求6所述的培養基，其特征在于：其中，種子萌發培養基：添加60 mg/L的赤霉素，80 mg/L的Vc，15 g/L的蔗糖，500mg/L的活性炭和10g/L的瓊脂粉，并調節培養基pH值至5.8；誘導培養基：添加0.05mg/L的TDZ，0.5 mg/L的BA，以及15 g/L的蔗糖和10g/L的瓊脂粉，調節培養基pH值至5.8；生根培養基：添加0.05mg/L或者0.1mg/L的IBA，0. 03 mg/L或者0.05mg/L的NAA，2mg/L的活性炭和7-8g/L瓊脂粉，調節培養基pH值至5.8。