[發明專利]冬蟲夏草菌絲快速培養方法

在審

• 申請號: 201811002927.3
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN109055239A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 鐘興林
• 申請（專利權）人: 重慶農笑農業發展有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

1.一種冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

Ⅰ.清洗；

Ⅱ.分離提純；

Ⅲ.培養復壯。

2.如權利要求1所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

Ⅰ.清洗：將新鮮那曲蟲草去除外部菌套，刷去冬蟲夏草表面雜質，先用消毒液進行消毒，再用滅菌水進行清洗，在無菌條件下，將所得僵蟲體切塊，得到蟲體塊；

Ⅱ.分離提純：在三角瓶中裝入400-800g PDA培養基，接著加入1-10mg植物激素，攪拌均勻后滅菌，再將蟲體塊接種在PDA培養基上，置于15-30℃的恒溫搖床上進行培養，直至培養基的表面長出菌絲，其中每天先以300-1000lx的白熾燈光照強度照射培養10-14h，然后以紫外線照射0.1-0.2h，再置于黑暗培養9.8-13.9h；

Ⅲ.培養復壯：在另一個三角瓶中裝入400-800g PDA培養基，接著加入PDA培養基質量0.1-0.6％的中藥提取物，攪拌均勻后滅菌，取步驟Ⅱ培養所得菌絲接種在PDA培養基上，置于15-30℃的恒溫搖床上進行培養，其中每天先以400-1600lx的白熾燈光照強度照射培養10-14h，再黑暗培養10-14h。

3.如權利要求1所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

Ⅰ.清洗：將新鮮那曲蟲草去除外部菌套，刷去冬蟲夏草表面雜質，先用消毒液進行消毒，再用滅菌水進行清洗，在無菌條件下，將所得僵蟲體切塊，得到蟲體塊；

Ⅱ.分離提純：在三角瓶中裝入400-800g PDA培養基，接著加入1-10mg植物激素，攪拌均勻后滅菌，再將蟲體塊接種在PDA培養基上，置于15-30℃的恒溫搖床上進行培養，直至培養基的表面長出菌絲，其中每天先以300-1000lx的白熾燈光照強度照射培養10-14h，然后以紫外線照射0.1-0.2h，再置于黑暗培養9.8-13.9h；

Ⅲ.培養復壯：在另一個三角瓶中裝入400-800g PDA培養基，接著加入PDA培養基質量0.1-0.6％的中藥提取物，攪拌均勻后滅菌，取步驟Ⅱ培養所得菌絲接種在PDA培養基上，先置于溫度為18-22℃、白熾燈照射培養的光照強度為300-600lx的條件下培養4-10d，接著置于溫度為25-30℃、白熾燈照射培養的光照強度為1000-1600lx的條件下培養4-10d，其中每天照射培養時間為10-14h，黑暗培養時間為10-14h。

4.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，步驟Ⅰ中所述消毒液為4-6wt％的次氯酸鈉水溶液或70-80wt％的乙醇水溶液。

5.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，所述PDA培養基由以下質量份的原料組成：馬鈴薯190-200份、水1000-2000份、瓊脂18-22份、蛋白粉2-5份、葡萄糖18-22份、磷酸二氫鉀2-4份、硫酸鎂1-2份。

6.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，步驟Ⅱ中所述植物激素包括吲哚乙酸、6-芐基腺嘌呤、脫落酸中的一種或多種。

7.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，所述滅菌的處理條件為壓力控制在0.1-0.15MPa，溫度控制在121-125℃，滅菌時間20-50min。

8.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，在步驟Ⅱ中所述紫外線照射過程中，所用紫外線燈的功率為20-35W，且紫外線燈設置在培養基上方20-45cm處。

9.如權利要求2或3所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，步驟Ⅲ中所述中藥提取物包括黃芪提取物、桑葉提取物、枸杞提取物中的一種或多種。

10.如權利要求5所述冬蟲夏草菌絲快速培養方法，其特征在于，所述PDA培養基的制備方法為：

Ⅰ.按質量份稱量各原料組分；

Ⅱ.將馬鈴薯去皮，去芽眼，切塊，接著加水，置于90-100℃下加熱20-40min，過濾，加入瓊脂，在90-100℃下加熱2-5min，再加入蛋白粉、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，混勻，調節pH值到5.0-6.0后即得。