[發明專利]一種胰腺癌標記物及其檢測方法

在審

• 申請號: 201811000436.5
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN108929914A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 肖明兵;金丹丹;吳紅培;江楓;倪潤洲;錢坤艷;陸翠華;倪溫慨;曹建中
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12N15/113
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 梁金娟

本發明提供一種胰腺癌標記物，其特征在于，包括以下在血清/血漿中穩定存在且可檢測的微小核糖核酸成熟體中的兩種或兩種以上：miR?212、miR?21、miR?193b、miR?200c和miR?181d；本發明還提供一種胰腺癌標記物的檢測方法，包括以下步驟：制備基因芯片、抽提待測樣品的胰腺癌標記物基因miRNA、逆轉錄及擴增、基因芯片雜交、基因芯片洗滌、結果分析；本發明利用基因芯片同時檢測兩種或兩種以上影響胰腺癌發生發展的指標，得到的綜合分析結果準確度高，提高檢測效率，降低檢測成本。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種胰腺癌標記物及其檢測方法。

背景技術

胰腺癌是常見惡性腫瘤之一，近年來發病率呈升高趨勢，且缺乏有效的診斷方法和治療措施，造成胰腺癌病人發現晚、預后差、死亡率高。對普通和高危人群進行定期篩查，是提高早期診斷率并及時發現疾病的有效措施之一。

事實上，胰腺癌的發生發展涉及多個基因表達改變，如果在胰腺癌發生早期就從基因水平對癌癥進行診斷，檢測重要相關基因的表達變化，將有利于癌癥的早期發現和早期治療，提高病人的生存率。

基因芯片(genechip)（又稱DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的?；蛐酒臏y序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序列，據此可重組出靶核酸的序列?；蛐酒鳛橐环N高通量的、先進的分子生物學技術，可應用于疾病基因表達變化的檢測，其具有高度的靈敏性和準確性、快速便捷、并可同時檢測多個基因表達變化等優點。目前，檢測胰腺癌的基因芯片都只能單一指標檢測，還沒有利用基因芯片同時檢測多種影響胰腺癌發生發展的指標的相關報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種胰腺癌標記物及其檢測方法，利用基因芯片可同時檢測多種指標，提高檢測效率和準確度，降低檢測成本。

為解決上述技術問題，本發明的實施例提供一種胰腺癌標記物，其特征在于，包括以下在血清/血漿中穩定存在且可檢測的微小核糖核酸成熟體中的兩種或兩種以上：miR-212、miR-21、miR-193b、miR-200c和miR-181d；其中，

所述miR-212為hsa-miR-212-5p，其序列為：ACCUUGGCUCUAGACUGCUUACU；

所述miR-21為hsa-miR-21-5p，其序列為：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；

所述miR-193b為hsa-miR-193-5p，其序列為：CGGGGUUUUGAGGGCGAGAUGA；

所述miR-200c為hsa-miR-200c-5p，其序列為：CGUCUUACCCAGCAGUGUUUGG；

所述miR-181d為hsa-miR-181d-5p，其序列為：AACAUUCAUUGUUGUCGGUGGG。

本發明還提供一種用于根據權利要求1所述的一種胰腺癌標記物的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備基因芯片，所述基因芯片均包括固相載體及固定于固相載體上的待測樣品，所述固相載體采用醛基化的載玻片；

所述基因芯片上分為質控部分和標記物檢測部分，所述質控部分包括陰性對照和陽性對照；其中，陰性對照包括空白組、點樣液組、擬南芥組，陽性對照包括內參U6、酵母基因序列1、酵母基因序列2；所述標記物檢測部分包括hsa-miR-212-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-193b-5p、hsa-miR-200c-5p和hsa-miR-181d-5p的Oligo探針；