[發明專利]正常肝干細胞向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法

有效

• 申請號: 201810998108.2
• 申請日: 2018-08-29
• 公開（公告）號: CN109097335B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 劉衛輝;馮亞星;任麗娜;溫旭東;王濤
• 申請（專利權）人: 劉衛輝
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 何紅信

本發明屬于肝干細胞惡性轉化技術領域，公開了一種正常肝干細胞向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法，所述誘導方法包括在正常肝干細胞中同時失調四種轉錄因子聯合誘導出肝癌干細胞的步驟；所述四種轉錄因子分別為TG737、miR10b、miR200a和CD44。本發明通過沉默TG737、過表達MiR?10b、沉默miR?200a和過表達CD44，實現了將正常肝干細胞向肝癌干細胞的惡性轉化，從而利用本發明的誘導方法可以為肝癌的研究提供實驗模型，利于肝癌疾病的研究。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種正常肝干細胞向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法。

背景技術

肝細胞癌(hepatocelluar carcinoma，HCC)是最常見的原發性肝癌類型，也是占全球癌癥相關死亡原因的第三位。HCC是一個復雜、多步驟的過程與各種遺傳因素改變的累積有關。HCC患者雖然可以經過手術切除、消融、化療栓塞、索拉菲尼等方案治療，但是由于腫瘤侵襲性高，肝內擴散及肝內轉移頻繁導致預后效果極差，5年內生存率低于5％。因此，提高對HCC復雜的分子機制的理解對于開發新的治療策略至關重要。

肝干/祖細胞(liver stem/progenitor cells,LSPCs)具有很高的增殖潛能，可能是唯一能在積累一定突變后轉化為啟動HCC的細胞。LSPCs還可能維持這些突變并將它們傳遞給子代肝細胞，導致LSPCs的惡性轉化為肝癌干細胞(liver cancer stem cells,LCSCs)，從而導致HCC啟動。大多數癌癥是通過基因中突變的積累來實現的，這些基因決定著細胞的增殖、細胞周期、細胞分化和侵襲。可以想象，改變調控細胞周期、細胞增殖、細胞分化和細胞侵襲的編碼和非編碼基因可能對LSPCs的惡性轉化具有顯著的影響。

有一小部分癌細胞構成了自我維持的細胞庫，具有獨特的自我更新和維持腫瘤增殖的能力，稱為癌癥干細胞(CSCs)。CSCs具有與相應正常干細胞相似的基因表達譜和與性質，同時在維持惡性腫瘤增殖、侵襲、轉移和復發方面起著決定性作用。越來越多的科學研究表明，CSCs存在于各種人類腫瘤中包括HCC。此外，在某些病理過程中，CSCs可能來自正常干/祖細胞的惡性轉化。

雖然HCC細胞的確切來源仍然未知，但是過去幾年累積的數據表明，由LSCPs轉化的LCSCs，很可能代表驅動癌癥發展的細胞。因此，利用這種細胞做好相關研究有可能為開發更有效的癌癥治療開辟新的曙光，并可能為開發有效消滅癌癥細胞提供機會。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明目的在于提供一種正常肝干細胞向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法，具體地，涉及正常肝干細胞(WB-F344)向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法。

WB-F344細胞系購買自中國科學院上海生命科學研究院生化細胞所細胞庫。

本發明所采用的技術方案為：

一種正常肝干細胞向肝癌干細胞惡性轉化的誘導方法，所述誘導方法包括在正常肝干細胞中同時失調四種轉錄因子聯合誘導出肝癌干細胞的步驟；所述四種轉錄因子分別為TG737、miR10b、miR200a和CD44。

進一步的，四種轉錄因子的具體失調方式分別為沉默TG737、過表達MiR-10b、沉默miR-200a和過表達CD44。

進一步的，所述正常肝干細胞為WB-F344。

進一步的，所述誘導方法的具體步驟包括：

A、構建可誘導慢病毒載體系統，得到慢病毒載體；

A1、構建短發夾shRNA可誘導慢病毒載體系統，轉錄因子為TG737和miR200a，得到短發夾shRNA可誘導慢病毒載體；

A2、構建真核表達載體pcDNA3.1可誘導慢病毒載體系統，轉錄因子為miR10b和CD44，得到真核表達載體pcDNA3.1可誘導慢病毒載體；