[發(fā)明專利]一種DNA甲基化程度的定量方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810997175.2
• 申請日: 2018-08-29
• 公開（公告）號: CN109022556A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅敏;趙勇娟;韓玥斌;劉煥
• 申請（專利權(quán)）人: 天津智魚生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種DNA甲基化程度的定量方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將亞硫酸鹽修飾的DNA加入PCR體系，進(jìn)行數(shù)字PCR；

(2)根據(jù)DNA的甲基化拷貝數(shù)和非甲基化拷貝數(shù)，得到DNA的甲基化程度；

其中，步驟(1)所述PCR體系包括Taqman探針，所述Taqman探針包括甲基化Taqman探針或非甲基化Taqman探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述Taqman探針的兩端分別修飾熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)；

優(yōu)選地，所述熒光基團(tuán)包括FAM、HEX或VIC中的任意一種；

優(yōu)選地，所述淬滅基團(tuán)包括BHQ1、BHQ2或MGB中的任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述PCR體系還包括引物、DNA聚合酶或dNTP中的任意一種或至少兩種的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述DNA的甲基化程度的計算方法包括：

DNA的甲基化拷貝數(shù)除以甲基化拷貝數(shù)和非甲基化拷貝數(shù)之和，得到所述DNA的甲基化程度。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(1)之前還包括亞硫酸鹽處理DNA的步驟。

6.一種如權(quán)利要求1-5任一項所述的方法在定量檢測cg10590292甲基化程度中的應(yīng)用。

7.一種cg10590292甲基化程度的定量方法，其特征在于，所述方法采用如權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，包括以下步驟：

(1’)對cg10590292進(jìn)行亞硫酸鹽處理；

(2’)將亞硫酸鹽修飾的cg10590292加入PCR體系，進(jìn)行數(shù)字PCR；

(3’)根據(jù)cg10590292的甲基化拷貝數(shù)和非甲基化拷貝數(shù)，利用甲基化拷貝數(shù)除以甲基化拷貝數(shù)和非甲基化拷貝數(shù)之和，得到cg10590292的甲基化程度。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(2’)所述PCR體系包括cg10590292的甲基化Taqman探針或非甲基化Taqman探針。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述cg10590292的甲基化Taqman探針包括如SEQ ID NO.1所示的核酸序列；

優(yōu)選地，所述cg10590292的非甲基化Taqman探針包括如SEQ ID NO.2所示的核酸序列。

10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一項所述的方法，其特征在于，步驟(2’)所述PCR體系還包括cg10590292基因的引物對；

優(yōu)選地，所述引物對如SEQ ID NO.3-4所示。