[發明專利]一種抗凝血的DNA納米復合結構及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810995000.8
• 申請日: 2018-08-29
• 公開（公告）號: CN110551725B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 丁寶全;趙帥;蔣喬;劉少利
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;A61K31/711;A61P7/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種基于DNA納米復合結構的抗凝劑，其特征在于，所述DNA納米復合結構包括DNA納米結構和抗凝血酶核酸適配體；

其中，所述DNA納米結構由DNA模板鏈、輔助折疊DNA鏈和捕獲DNA鏈自組裝而成；

所述抗凝血酶核酸適配體通過與捕獲DNA鏈雜交結合在DNA納米結構的表面，所述結合能被與核酸適配體互補的解毒序列競爭破壞，逆轉DNA納米復合結構的抗凝血功能；

所述抗凝血酶核酸適配體包括TTT-TBA15和TAT-HD22；

通過DNA雜交，實現抗凝血酶核酸適配體在DNA納米結構表面的精確定位，并通過調整適配體在DNA納米結構上分布的種類、位點數量、分布密度和相對距離，形成核酸適配體陣列，用于結合凝血酶功能位點，抑制凝血酶活性，實現抗凝。

2.根據權利要求1所述的抗凝劑，其特征在于，所述DNA模板鏈包括M13mp18噬菌體基因組環狀單鏈DNA、Lamda DNA、經過基因改造過的M13噬菌體基因組DNA或非對稱PCR擴增產物中的任意一種或至少兩種的組合。

3.根據權利要求2所述的抗凝劑，其特征在于，所述DNA模板鏈為M13mp18噬菌體基因組環狀單鏈DNA。

4.根據權利要求3所述的抗凝劑，其特征在于，所述M13mp18噬菌體基因組環狀單鏈DNA的核苷酸序列為SEQ ID NO.1。

5.根據權利要求1所述的抗凝血劑，其特征在于，所述DNA納米復合結構的形狀包括長方形片層、三角形片層、管狀、盒狀或球形中的任意一種。

6.根據權利要求5所述的抗凝劑，其特征在于，所述DNA納米復合結構的形狀為三角形片層和/或長方形片層。

7.根據權利要求6所述的抗凝劑，其特征在于，所述三角形片層為等邊三角形，其邊長為80-100nm。

8.根據權利要求6所述的抗凝劑，其特征在于，所述長方形片層的邊長為(50-70)nm×(80-100)nm。

9.根據權利要求1所述的抗凝劑，其特征在于，所述抗凝血適配體的個數為2-3個。

10.根據權利要求9所述的抗凝劑，其特征在于，所述抗凝血適配體的個數為2個。

11.根據權利要求1所述的抗凝劑，其特征在于，所述TTT-TBA15的核苷酸序列為SEQ IDNO.11，所述TAT-HD22的核苷酸序列為SEQ ID NO.12。

12.根據權利要求1所述的抗凝劑，其特征在于，所述捕獲DNA鏈包括捕獲DNA鏈I和捕獲DNA鏈II。

13.根據權利要求12所述的抗凝劑，其特征在于，所述捕獲DNA鏈I由在輔助折疊鏈的5’端加上與適配體TTT-TBA15的序列部分互補雜交的捕獲序列I形成，所述捕獲序列I的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

14.根據權利要求12所述的抗凝劑，其特征在于，所述捕獲DNA鏈II由在輔助折疊鏈的5’端加上與適配體TAT-HD22的序列部分互補雜交的捕獲序列II形成，所述捕獲序列II的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。

15.根據權利要求1所述的抗凝劑，其特征在于，所述DNA納米復合結構的制備方法包括如下步驟：

(1)將DNA模板、輔助折疊鏈和捕獲DNA鏈按比例混合于緩沖溶液中進行退火，得到DNA折紙結構；

(2)將步驟(1)得到的產物離心后與抗凝血酶核酸適配體混合并退火；

(3)將步驟(2)得到的產物離心后得到所述DNA納米復合結構；

步驟(2)所述抗凝血酶核酸適配體包括TTT-TBA15和TAT-HD22。