[發明專利]一種端基為谷氨酸的呈鮮多肽表面分子印跡聚合物硅膠微球的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810994201.6
• 申請日: 2018-08-29
• 公開（公告）號: CN110871055B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 胡小剛;何佩玲;羅曉燕;鄭雪屏
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;C08F292/00;C08F216/14;C08J9/26
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司 44425
• 代理人: 吳靜芝

本發明涉及一種端基為谷氨酸的呈鮮多肽的表面分子印跡聚合物硅膠微球的制備方法，包括步驟：采用稀鹽酸浸泡法，對硅膠微球表面進行除雜處理，得到活化硅膠微球；對活化硅膠微球進行表面硅烷化改性，得到硅烷化硅膠微球；對硅烷化硅膠微球進行RAFT功能化處理，得到表面接枝雙硫酯鍵的RAFT功能化硅膠微球；替代模板分子、金屬離子和功能單體自組裝后，加入交聯劑、引發劑以及RAFT功能化硅膠微球，通過RAFT聚合反應，得到表面包覆有替代模板分子的分子印跡涂層微球；洗脫除去表面包覆的替代模板分子；其中，所述替代模板分子為L?谷氨酸，所述金屬離子為Cusupgt;2+/supgt;，所述功能單體為1?(N，N?雙羧甲基)氨基?3?烯丙基甘油。

技術領域

本發明屬于化學分析測試領域，尤其涉及一種端基為谷氨酸的呈鮮多肽表面分子印跡聚合物硅膠微球的制備方法和應用。

背景技術

醬油是我國傳統的釀造制品，是老百姓日常生活中不可或缺的調味品。獨特的色、香、味使其成為深受我國人民喜愛的傳統調味品。而鮮味是醬油中最重要的評價指標。人們發現釀造醬油中存在一類分子量在500Da以下的小分子多肽，這些小分子多肽能夠顯著提高食品整體鮮味強度，是釀造醬油中的風味物質，人們稱這些小分子多肽為呈鮮多肽。經研究發現，大多數的呈鮮多肽是端基氨基酸為谷氨酸或天冬氨酸的二肽和三肽。借此，人們可以通過檢測和分析釀造醬油中的呈鮮多肽的種類和含量，進一步揭示和掌握醬油的呈鮮機理。

目前，對于呈鮮多肽的分析方法主要為液相色譜法和液相色譜/質譜法。此兩種方法均需先對樣品溶液，即醬油進行預處理。而針對氨基酸、小分子多肽和蛋白質的分離和檢測的樣品預處理技術中，表面印跡技術作為一種新型的樣品預處理技術，受到愈來愈廣泛地關注。表面印跡技術的作用原理類似于酶-底物的“鑰匙-鎖”相互作用原理，以硅膠等材料作為支撐固相，以目標分子作為模板分子，通過化學反應生成相應地化學鍵將模板分子結合在支撐固相上，然后通過洗脫等手段將模板分子脫去，從而在支撐固相表面留出一個空位用于結合目標分子。由于模板分子與目標分子相同，因此，支撐固相表面留出的結合空位，只能特異性吸附結合目標分子，從而大大地提高了對樣品溶液中目標分子的選擇性，降低了與樣品溶液中其他分子結合的概率，從而大大提高了檢測的準確率。在該項技術中，我們將已經洗脫掉模板分子，留有支撐固相和表面目標分子結合空位的結構稱為表面分子印跡聚合物。可以看出，表面印跡技術只需將樣品溶液與表面分子印跡聚合物接觸，即可完成樣品溶液中目標分子的結合分離，操作十分簡便且耗時少。

但現有技術中，用于檢測氨基酸和多肽的表面分子印跡聚合物存在包覆不均勻、厚度不均一、性能不穩定等缺點。并且，現有的表面分子印跡聚合物的制備方法中，主要通過分子間作用力將模板分子結合到支撐固相上，由于分子間作用力十分微弱，因此結合到支撐固相上的模板分子數量有限，相應地所形成的結合空位數量也有限，使得所制得表面分子印跡聚合物不能夠盡量多的或者完全吸附結合樣品溶液中的目標分子，從而影響了檢測的準確性。另外，現有技術中尚未將表面印跡技術應用于呈鮮多肽的檢測和分析。

發明內容

基于此，本發明提供一種端基為谷氨酸的呈鮮多肽表面分子印跡聚合物硅膠微球的制備方法，以制備得到包覆均勻、厚度均一、性能穩定、能夠同時特異性吸附多種端基為L-谷氨酸的呈鮮多肽分子、以及硅膠微球與模板分子之間的化學鍵更加牢固的表面分子印跡聚合物。

本發明的端基為谷氨酸的呈鮮多肽的表面分子印跡聚合物硅膠微球的制備方法，包括以下步驟：

S1：采用稀鹽酸浸泡法，對硅膠微球表面進行除雜處理，得到活化硅膠微球；

S2：采用硅烷化試劑對活化硅膠微球進行表面硅烷化改性，得到硅烷化硅膠微球；

S3：采用RAFT試劑對硅烷化硅膠微球進行RAFT功能化處理，得到表面接枝雙硫酯鍵的RAFT功能化硅膠微球；