[發明專利]實施體積排阻色譜的設備和方法

在審

• 申請號: 201810994103.2
• 申請日: 2010-12-15
• 公開（公告）號: CN109078626A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發明（設計）人: E.S.P.布維耶;K.D.懷恩漢;T.H.沃特;U.D.諾伊
• 申請（專利權）人: 沃特世科技公司
• 主分類號: B01J20/28
• 分類號: B01J20/28;B01J20/282;B01J20/286;B01D15/34
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 段菊蘭;萬雪松

本發明涉及實施體積排阻色譜的設備和方法。本發明的實施方式以在常規高效液相色譜或超高效液相色譜壓力及更高壓力下使用小顆粒的體積排阻色譜的設備和方法為特征。

本申請是申請日為2010年12月15日的申請號為201080061579.2的題為“實施體積排阻色譜的設備和方法”的發明專利申請的分案申請。

相關申請

本申請要求享有2009年12月15日提交的美國臨時專利申請第61/286,582號和2009年6月17日提交的美國臨時專利申請第61/355,970號的優先權，這兩篇申請的全部公開內容通過引用結合于此。

技術領域

本發明涉及實施體積排阻色譜的設備和方法。本發明的實施方式以在常規高效液相色譜或超高效液相色譜壓力及更高壓力下使用小顆粒的體積排阻色譜的設備和方法為特征。

發明背景

本發明將使用如下定義的以下術語，除非出現該術語的上下文要求不同的含義。

色譜是用于濃縮或分離在混合物中發現的一種或更多種化合物的分離方法。化合物通常存在于樣品中。本文使用術語“樣品”廣泛地代表其中一個個體需要分析的任何混合物。術語“混合物”在含有一種或更多種溶解的化合物的流體的意義上使用。流體可包含水和/或其它液體和氣體。感興趣的化合物稱為被分析物。

色譜是一種差異化的遷移過程?；旌衔镏械幕衔镆圆煌乃俾式涍^色譜柱，導致它們的分離。這種遷移通過與被稱為固定相的顆粒填沖床或多孔整體結構有關的被稱為流動相的流體的傳送而發生。在某些色譜模式下，差異化遷移由被分析物與固定相和流動相的親和性的差異而發生。

體積排阻色譜(SEC)是基于水動力半徑來分離或孤立混合物中的各被分析物的一類色譜。在SEC中，分離因為被分析物探測多孔性固定相介質的體積的能力不同而發生。參見例如A.M.Striegel等人，Modern Size-Exclusion Chromatography:Practice ofGelPermeation and Gel Filtration Chromatography，第二版，Wiley，NJ，2009。SEC典型地用于分離大分子或分子的復合物。例如，非限制性地，許多生物來源的大分子例如脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)，蛋白質、多糖、以及其片斷和復合物都用SEC分析。合成多聚物、塑料等也用SEC分析。

SEC一般使用具有顆粒填充床的柱子來實施。這種顆粒的填充床是分離介質或者固定相，流動相將流經所述介質或固定相。放置柱子使其與泵和樣品注射器流體相通。通過樣品注射器在壓力下將樣品混合物加載到柱子上，混合物和流動相在泵的推動下通過柱子?；旌衔镏械幕衔镫x開柱子或從柱子上洗脫，最大的化合物首先離開，最小的分子最后離開。

放置柱子使其與檢測器流體相通，當溶液離開柱子時，檢測器能檢測溶液的性質的變化。檢測器將把這些變化作為圖(稱為色譜圖)登記和記錄，用于確定被分析物的存在與否。被分析物離開柱子的時間是分子的大小的指示。分子的分子量能使用標準校正曲線來估算。用于體積排阻色譜的檢測器的例子是但不限于，折光率檢測器、紫外檢測器、光散射檢測器和質譜儀。

希望具有用于SEC技術的柱子，所述柱子能在高于5000psi的壓力和高流速下操作以加速分析時間。還希望具有附加的或提高的效率和分辨率；減少的溶劑使用量；改善的與先進的檢測器的兼容性。希望具有帶如此固定相的柱子，所述固定相具有精確定義的孔隙結構和粒徑以產生可高重復的結果。最后，希望具有帶如此固定相的柱子，所述固定相具有與生物大分子相容的表面修飾基團。

發明內容