[發(fā)明專利]快速檢測人類Y染色體微缺失的多重PCR引物組、試劑盒和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810990772.2
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN108998516A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曉輝;徐素茹;覃彩種;韋秋燕
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州達(dá)暉生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 佛山幫專知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44387
• 代理人: 顏春艷

1.一種快速檢測人類Y染色體微缺失的多重PCR引物組，其特征在于，所述多重PCR引物組包括通用引物和特異性引物，可同時擴(kuò)增6個與Y染色體微缺失檢測相關(guān)的位點(diǎn)和內(nèi)參基因：

所述通用引物具有如SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：37所示的堿基序列；

所述6個與Y染色體微缺失檢測相關(guān)的位點(diǎn)包括：sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255位點(diǎn)；

所述內(nèi)參基因?yàn)镾RY；

所述特異性引物包括具有如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6～SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11～SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16～SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21～SEQ IDNO：24、SEQ ID NO：26～SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31～SEQ ID NO：34所示的堿基序列。

2.一種快速檢測人類Y染色體微缺失的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括PCR反應(yīng)液I、PCR反應(yīng)液II和純水，

所述PCR反應(yīng)液I包括第一多重PCR引物組、第一探針和qPCR Probe Master Mix；

所述PCR反應(yīng)液II包括第二多重PCR引物組、第二探針和qPCR Probe Master Mix；

所述第一多重PCR引物組包括具有如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6～SEQID NO：9、SEQ ID NO：11～SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16～SEQ ID NO：19所示的堿基序列的特異性引物和具有如SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：37所示的堿基序列的通用引物；

所述第二多重PCR引物組包括具有如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6～SEQID NO：9、SEQ ID NO：11～SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16～SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21～SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26～SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31～SEQ ID NO：34所示的堿基序列的特異性引物和具有如SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：37所示的堿基序列的通用引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測人類Y染色體微缺失的試劑盒，其特征在于，所述第一探針包括具有如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：20所示的堿基序列；所述第二探針包括具有如SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：35所示的堿基序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測人類Y染色體微缺失的試劑盒，其特征在于，所述第一探針和第二探針包括TaqMan-MGB探針或TaqMan探針；所述第一探針和第二探針的熒光標(biāo)記包括FAM、VIC、TRAM、CY5或其組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測人類Y染色體微缺失的試劑盒，其特征在于，所述qPCR Probe Master Mix包括：PCRbuffer緩沖液、熱啟動Taq DNA酶、dNTPs、dUTP、UNG酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速檢測人類Y染色體微缺失的試劑盒，其特征在于，所述PCRbuffer緩沖液包括：20～80mmol/L Tris-HCl、1％Tween-20、2～8mmol/LNaN₃、2～10mmol/LMgCl₂；

所述熱啟動Taq DNA聚合酶的濃度為50U/ml～200U/ml；

所述UNG酶的濃度為50U/ml～200U/ml；

所述dNTPs的濃度為20～200μM；

所述dUTP的濃度為5～100μM；

所述dNTPs與dUTP摩爾用量比為2～4:1。