[發明專利]一種彩色馬蹄蓮的高效脫毒方法

在審

• 申請號: 201810990469.2
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109122317A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 張金博
• 申請（專利權）人: 江蘇高航農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 趙登高

1.一種彩色馬蹄蓮的高效脫毒方法，其特征在于，該脫毒方法的詳細步驟如下：

S1、彩色馬蹄蓮花蕾的取材與預處理

在11月~12月彩色馬蹄蓮現蕾時期，選擇晴天上午取材，將摘得的花蕾裝入冰壺中帶回實驗室，篩選花粉小孢子處于單核靠邊期的花蕾，置于32℃熱激處理2d；

S2、花蕾消毒與花藥預處理

將上述花蕾用自來水沖洗20~30min，置于超凈工作臺中，先用75%的酒精消毒30s，用無菌水沖洗2~3次，再用0.1%升汞+2~3滴吐溫-80浸泡8min，用無菌水沖洗3~4次；在解剖鏡下用鑷子撥開花蕾取出花藥放在0.2mol/L的甘露醇溶液中預處理3d；

S3、花藥接種與誘導培養

將上述預處理后的花藥用無菌濾紙吸干表面多余的液體，然后接種在誘導培養基上，每瓶培養基接種40~50枚花藥，置于溫度24~26℃，相對濕度65~75%的黑暗條件下培養，培養48~60d可誘導出淡黃色的愈傷組織；

S4、愈傷組織增殖培養

將步驟S3獲得的愈傷組織轉接到增殖培養基上繼續培養，每30d繼代一次，繼代2~4次后可獲得大量的愈傷組織；培養條件控制為溫度24~26℃，相對濕度65~75%，光照強度1500~2000Lux，光照10h/d；

S5、愈傷組織分化培養

無菌條件下將上述獲得的愈傷組織分別轉接到分化培養基上，置于23~27℃、相對濕度65~75%、光照強度1800~2200Lux、光照12~14h/d的培養條件下進行愈傷組織分化培養，培養28~34d后愈傷組織分化出不定芽；

S6、水培生根

待步驟S5中分化出的不定芽長到1.5~2.0cm時，將小芽從愈傷組織上切下，接種到生根培養液中，進行水培生根；培養條件控制為溫度22~25℃、相對濕度60~80%、光照強度2500~3000Lux、光照15~17h/d，培養22~28d可得到長出5~8條根系的彩色馬蹄蓮幼苗；

S7、煉苗與移栽

待彩色馬蹄蓮幼苗長到10cm左右時，將組培瓶移到溫室大棚中，大棚的溫度控制在20~27℃、濕度控制在80%~90%，將組培瓶的瓶口打開，在自然光光照的條件下煉苗5~7d；將幼苗從組培瓶中取出，移栽入大棚的栽培基質中，定期澆水和營養液，進行常規栽培管理；

S8、彩色馬蹄蓮非二倍體植株的剔除

移栽后的彩色馬蹄蓮幼苗生長到現蕾期時，將非二倍體植株剔除，剩余的則為彩色馬蹄蓮正常二倍體植株。

2.根據權利要求1所述的一種彩色馬蹄蓮的高效脫毒方法，其特征在于，所述步驟S1中篩選花蕾的方法為：將花蕾中的花藥挑取2~4枚碾碎，釋放出花粉，用DAPI染色后鏡檢確認小孢子發育時期為單核靠邊期。