[發明專利]一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法

有效

• 申請號: 201810988764.4
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109206532B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 黃儒強;王靜輝;王倩;高林林;張競雯
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

本發明公開了一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法，該方法包括以下步驟：將桃金娘果實回流提取，得桃金娘果實粗多糖，然后加入30％H₂O₂溶液脫色；脫色后的多糖加入Sevag試劑去蛋白，得到初步純化的桃金娘果實多糖；用梯度濃度的NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用苯酚?硫酸法檢測洗脫液在檢測波長為490nm的吸光度值，根據洗脫曲線合并相同流分，濃縮、透析、凍干，分別得到多糖P1、P2、P3和P4。本發明建立了一條完整可行的桃金娘果實多糖提取、分離純化、結構特征和生物活性研究的技術路線，為野生植物資源桃金娘果實多糖的提取分離純化提供了技術指導。

技術領域

本發明涉及一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法。

背景技術

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa)又名崗稔(廣東)、豆稔干(廣西)、石都捻子(《本草拾遺》)、倒捻子(《嶺表錄異》)、倒粘子(《蘇沈良方》)等，廣泛分布于南亞熱帶區域；在常綠闊葉林生態系統為優勢種，覆蓋度30％～60％，呈先鋒群落；在中國主要分布于嶺南，是我國南方地區主要的林下植被，資源非常豐富，大多生于丘陵坡地、曠野、路邊，而且野生桃金娘的分布面積廣泛，但目前對其開發利用率較低，加工利用水平也相對較低，桃金娘屬于一種尚未進行規模化開發利用的潛在的食品新資源。

桃金娘的果實為漿果，成熟時果皮呈紫黑色，果肉則呈紫紅色，肉質多汁，營養豐富。有研究表明，野生桃金娘果實成熟時，總糖含量占8.06％、還原糖占7.72％、果膠占1.01％、總酸占0.38％、蛋白質占1.30％、脂肪占0.32％、淀粉占3.08％、粗纖維占34.97％，維生素C含量為5.48mg/kg。

桃金娘果實含有多糖類、黃酮類、皂苷類、多酚類、蒽醌類等多種活性成分，具有抗氧化、抗衰老、抗炎、抑菌、保肝等生物活性。作為一種野生植物資源，桃金娘在食品加工、保健品開發及醫學藥物研究等方面有著廣闊的開發前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法，利用水提醇沉法對桃金娘果實進行多糖提取，并通過離子交換柱層析法對多糖進行分離純化，由此提取分離出純度較高、具有生物活性的多糖組分。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法，包括以下步驟：

(1)提取桃金娘果實多糖：將桃金娘果實烘干并粉碎，取其干粉和蒸餾水于回流裝置中煮沸提取數次，合并提取液并減壓濃縮，在濃縮液中加入數倍體積的95％(V/V)乙醇，不斷攪拌使多糖均勻沉淀，然后在4℃下靜置12h以上，離心收集沉淀，烘干后得桃金娘果實粗多糖；

步驟(1)所述的煮沸提取，每次的提取時間優選4h；

步驟(1)所述的離心優選5000r/min離心15min；

(2)H₂O₂法脫色：取桃金娘果實粗多糖加蒸餾水溶解，調節pH值至8.0，然后一邊滴加30％H₂O₂溶液，一邊攪拌，直至溶液顏色變淺，隨后在50℃水浴下保溫2h；

步驟(2)所述的粗多糖加蒸餾水溶解的濃度優選0.2g/mL；

(3)Sevag法脫蛋白：在脫色后的多糖溶液中加入該溶液1/5體積的Sevag試劑，振蕩培養20min，靜置10min后離心，棄去下層有機相和中間層蛋白質與氯仿和正丁醇生成的凝膠物，重復該離心和棄去有機相、凝膠物的操作若干次；最后一次操作后，旋蒸除去溶液中殘留的Sevag試劑，得到脫蛋白后的桃金娘果實多糖溶液，按步驟(1)的醇沉法收集沉淀，烘干后得初步純化的桃金娘果實多糖；

步驟(3)所述的Sevag試劑，是由氯仿和正丁醇按體積比5:1組成；